[发明专利]一种用于肺结核诊断的结核分枝杆菌组合抗原

说明书

技术领域

本发明涉及免疫诊断领域，特别是活动性肺结核疾病的诊断领域。

背景技术

结核病仍然是当今严重威胁人类健康的重大疾病之一。根据世界卫生组织(WHO)于2013年的报道数据，仅2012年世界新发结核病约860万人，因ZC核病死亡人数约130万。对于结核病的防控，依然是全世界面临的重大挑战。

早期、快速的结核诊断方法对于防控结核病具有重要意义。目前，研究人员已开发了多种用于结核病诊断的方法，包括结核菌素皮肤试验，痰涂片，痰培养以及PCR等。这些方法对结核病的防控做出了一定的贡献。然而，当前的诊断方法在临床实践中仍然存在明显的局限性，无法满足临床需求。例如，结核菌素皮肤试验不适合于卡介苗接种人群；痰涂片法检测灵敏性较低，仅为30-40％；作为结核病诊断金标准的痰培养检测法，其灵敏性也只有50-60％，且该方法较为耗时，一般需要4-8周的时间；PCR检测法在一定程度上促进了结核病快速检测技术的发展，但结核分枝杆菌内源性的抑制因子以及检测过程常导致出现一些假阳性或假阴性结果，且该方法对设备与检测人员专业水平均有较高要求，不适合于在较为贫困的发展中国家推广，而这些发展中国家恰是结核病患者主要分布的地区。因此，在结核病防控领域，仍然急需一种快速、高效、廉价的诊断方法。

血清学检测具有易操作、成本低、省时和可测试大量样本等优点，是一类较为有前景结核病诊断方法。

结核分枝杆菌感染后，作为对结核抗原的应答，患者体液中将产生特异性抗体，可作为结核病诊断的潜在标志物，因此备受研究人员关注。目前，研究人员已尝试了用多种结核分枝杆菌抗原进行血清中抗体检测，以用于结核病的诊断，如结核分枝杆菌抗原38kDa、16kDa、ESAT6、ES-31、19kDa、CFP-10等。但迄今为止，没有一种抗原能够在结核病诊断中达到满意的灵敏度与特异性。有研究人员提出了通过多个抗原联合检测进行结核病诊断，并较单个抗原相比显著提高了诊断效能。然而，以往研究中报道的这些抗原或方法往往在痰培养阴性的结核病患者中难以达到较为满意的诊断效果。基于此，寻找一组在痰培养阳性与阴性结核病人群中均具有较好诊断效能的新型抗原，具有重要研究意义与临床应用价值，也是该研究领域面临的重要问题。

结核分枝杆菌RD区是致病菌株特定的序列，编码多种结核特异性抗原。本发明人对结核分枝杆菌RD区多种抗原进行了研究，令人惊奇地发现3个结核分枝杆菌RD区抗原在痰涂片阴性(痰培养阳性)的肺结核病患者中诱导较高水平的抗体应答，对于活动性肺结核病诊断，尤其是对诊断难度较大的痰涂片阴性(包括痰培养阳性和阴性患者)患者具有重要意义。在此基础上，本发明人进一步将所筛选的3种抗原组合用于活动性肺结核病的体外免疫诊断，建立了一种基于ELISA技术的肺结核病高效诊断方法，该方法与以往的相关报告相比，尤其是针对痰涂片阴性患者，具有高灵敏性与特异性。

发明内容

本发明涉及一种检测生物样品中结核抗体的抗原组合，所述抗原组合是Rv3871、Rv3876和Rv3879的抗原组合。

在该实施方案的一个方面中，抗原组合中抗原Rv3871、Rv3876和Rv3879是分开的抗原。在另一个方面中，抗原组合中抗原Rv3871、Rv3876和Rv3879中任两种抗原或者3种抗原融合在一起。

在该实施方案的再一个方面中，在抗原组合中，抗原Rv3871是全长序列(SEQ ID NO.1)、第60位氨基酸至第96位氨基酸的序列(SEQ ID NO.2)或者它们的衍生序列；抗原Rv3876是全长序列(SEQ ID NO.3)、第380位氨基酸至第510位氨基酸的序列(SEQ ID NO.4)或者它们的衍生序列；抗原Rv3879是全长序列(SEQ ID NO.5)、第130位氨基酸至第220位氨基酸的序列(SEQ ID NO.6)或者它们的衍生序列。

本发明还涉及抗原组合用于制造检测肺结核病的试剂的用途，所述抗原组合是Rv3871、Rv3876和Rv3879的抗原组合。

在该实施方案的一个方面中，抗原组合中抗原Rv3871、Rv3876和Rv3879是分开的抗原。在另一个方面中，抗原组合中抗原Rv3871、Rv3876和Rv3879中任两种抗原或者3种抗原融合在一起。