[发明专利]一种高亲和力抗重金属镉单克隆抗体及其应用有效
申请号: | 201510106078.6 | 申请日: | 2015-03-11 |
公开(公告)号: | CN104762268B | 公开(公告)日: | 2017-12-29 |
发明(设计)人: | 向军俭;刘艳梅;钟辉;黄建芳 | 申请(专利权)人: | 暨南大学 |
主分类号: | C12N5/20 | 分类号: | C12N5/20;C07K16/44;C12N15/13;G01N33/577;G01N33/543 |
代理公司: | 广州粤高专利商标代理有限公司44102 | 代理人: | 陈卫 |
地址: | 510632 广东*** | 国省代码: | 广东;44 |
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摘要: | |||
搜索关键词: | 一种 亲和力 重金属 单克隆抗体 及其 应用 | ||
1.一株分泌高亲和力抗重金属镉单克隆抗体的杂交瘤细胞株1H9,其特征在于,该杂交瘤细胞株1H9于2015年3月4日保藏于中国典型培养物保藏中心,保藏编号为CCTCC C201521。
2. 一种高亲和力抗重金属镉单克隆抗体1H9,其特征在于,由权利要求1所述杂交瘤细胞株1H9分泌所得;所述单克隆抗体1H9的可变区包括重链可变区和轻链可变区;所述重链可变区基因序列如SEQ ID NO.1所示,所述轻链可变区基因序列如SEQ ID NO.2所示;所述重链可变区氨基酸序列如SEQ ID NO.3所示,所述轻链可变区氨基酸序列如SEQ ID NO.4所示。
3.权利要求2所述高亲和力抗重金属镉单克隆抗体1H9在制备金属镉的免疫学检测试剂盒方面的应用。
4.一种非诊断的金属镉的直接竞争Elisa检测方法,其特征在于,步骤如下:
(1)包被:将权利要求2的镉单克隆抗体1H9稀释至工作浓度加入包被板,37℃条件下孵育后,再用脱脂奶粉和聚乙二醇20000为混合封闭液,37℃恒温封闭;
(2)加样:每孔分别加入待测样品和酶标物Cd-EDTA-HRP,37℃孵育后,进行TMB底物显色,浓硫酸终止实验,进行酶标仪读数测定结果。
5.根据权利要求4所述金属镉的直接竞争Elisa检测方法,其特征在于,步骤(1)包被:将镉单克隆抗体1H9稀释至工作浓度,每孔100μL,37℃条件下孵育3小时后,用PBST缓冲液洗涤3次,再用5%的脱脂奶粉和2%的聚乙二醇20000为混合封闭液,37℃恒温封闭1小时,PBST缓冲液洗涤3次。
6.根据权利要求4所述金属镉的直接竞争Elisa检测方法,其特征在于,步骤(2)加样:每孔分别加入50μL的待测样品和50μL工作浓度酶标物Cd-EDTA-HRP,37℃孵育10min,PBST缓冲液洗涤3次,进行TMB底物显色,37℃避光15min,2M的浓硫酸终止实验,进行酶标仪读数测定结果。
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