[发明专利]一种鸡传染性支气管炎血凝抑制抗体检测方法

权利要求书

1.一种鸡传染性支气管炎血凝抑制抗体检测方法，包括待检血清的处理和血凝抑制试验，其特征在于：具体步骤如下：

步骤1：待检血清的处理

（1）取高岭土25g，加0.85%生理盐水至100ml，即为25%的高岭土悬液，2~8℃保存备用；

（2）取40μl待检血清，加入120μl （1）制备的血清处理液，振荡混匀，室温放置30分钟，再以3000r/min离心10分钟，取上清液；

（3）所得上清液中加入2μl鸡红细胞血球泥，轻微振荡混匀，室温放置30分钟，再以3000r/min离心10分钟，取上清液即为1:4稀释的待检血清；

步骤2：血凝抑制试验

取96孔V型微量反应板，每孔加入25μl PBS；

分别吸取25μl步骤1得到的1:4稀释的待检血清，加至每块的第一排各相应孔内，并在每块板上设标准阳性血清和阴性血清对照，然后2倍系列稀释；

分别向各孔内加入含4HA单位的抗原25μl，2～8℃静置30分钟；

每孔中加入0.5%鸡红细胞悬液25μl，轻轻混匀，2～8℃静置40分钟；

结果判定：

 将反应板倾斜，凡血清反应孔与红细胞对照孔中红细胞以同样速度从孔底流淌者判为血凝抑制，当阴性血清HI效价≤2.0log2、阳性血清HI效价与规定效价相比误差≤2.0log2时，试验方可成立，以完全抑制4HA单位抗原的血清最高稀释度作为HI效价。

2.根据权利要求1所述的鸡传染性支气管炎血凝抑制抗体检测方法，其特征在于，步骤1中所述的鸡红细胞血球泥的制备方法为：加抗凝剂采SPF鸡血，用PBS或生理盐水洗，轻轻混匀，3500r/min，吸去上清，如此反复洗3次，即得到鸡红细胞血球泥。