[发明专利]铁皮石斛破损蒴果种子瓶播组培方法

权利要求书

1.铁皮石斛破损蒴果种子瓶播组培方法，其特征在于包括以下步骤：

1)破损蒴果消毒前预处理：用棉花团蘸取浓度为75％的乙醇擦拭蒴果表面，避开蒴果开裂处，待乙醇自然挥发后，打开蒴果，取粉末状种子均匀地铺开在消毒容器内；

2)种子用紫外线灯消毒：将含有铁皮石斛种子的消毒容器，放置在实验或生产用的无菌操作台上，风速调至最低速档位并打开紫外灯，紫外线照射1～2h；

3)消毒后种子的瓶播育苗：将步骤2)消毒后的铁皮石斛种子均匀撒播抗菌种子萌发培养基上，2～3周后，种子萌发成原球，3个月后原球茎分化带有1～3片小叶的小苗，并统计种子萌发成活率；所述抗菌种子萌发培养基为MS+0.5～1mg/L NAA+10～40mg/L异噻唑啉哃+30g/L蔗糖+7.2g/L琼脂粉；

4)生根壮苗培养：将步骤3)种子萌发得到的苗，转移到生根壮苗培养基内生长，2个月后观察并记录生长状况。

2.如权利要求1所述的铁皮石斛破损蒴果种子瓶播组培方法，其特征在于：步骤2)中紫外线照射为1.5h。

3.如权利要求1或2所述的铁皮石斛破损蒴果种子瓶播组培方法，其特征在于：步骤3)中所述异噻唑啉哃的浓度为15～40mg/L。

4.如权利要求1所述的铁皮石斛破损蒴果种子瓶播组培方法，其特征在于：步骤3)中所述生根壮苗培养基为每升含蛋白胨2.5g、水解酪蛋白0.2g、蔗糖30g、琼脂4.5g、α-萘乙酸3mg、肌醇60mg、盐酸硫胺12mg、甘氨酸4.0mg、烟酸2.5mg、D-泛酸钙2.0mg、抗坏血酸1.0mg、吡哆辛盐酸1.5mg、生物素0.20mg、香蕉匀浆60g、胡萝卜汁40g、苹果汁40g、马铃薯汁30g，其余为MS培养基中的大量元素和微量元素成分。

5.如权利要求1或2所述的铁皮石斛破损蒴果种子瓶播组培方法，其特征在于：在上述3)～4)各步骤中所用的培养基均为pH 5.4～6.2，培养温度为29℃，光照强度为1800lx，光照时间为11h/d。