[发明专利]一种雷公藤中未知的倍半萜吡啶生物碱的快速分析方法

权利要求书

1.一种雷公藤中未知的倍半萜吡啶生物碱的快速分析方法，其特征在于，该方法包括(1)雷公藤中活性成分提取；(2)利用电喷雾-四级杆-飞行时间质谱仪对已知的单一倍半萜吡啶生物碱的碎片离子进行分析，特别是对来自于骨架裂解的碎片离子进行分析；(3)液质联用分析，即利用高效液相色谱-电喷雾-四级杆-飞行时间质谱仪获得复杂体系中倍半萜吡啶生物碱的二级质谱，即获得未知化合物的碎片离子，其中利用了两种方法分别获得复杂体系中倍半萜吡啶生物碱碎片离子的轮廓图；(4)通过比较已知与复杂体系中倍半萜吡啶生物碱碎片离子的轮廓图以及比较它们的特征碎片离子，从而实现对复杂体系中未知的倍半萜吡啶生物碱进行快速的骨架以及C1与C2侧链结构分析。

2.如权利要求1所述的雷公藤中未知的倍半萜吡啶生物碱的快速分析方法，其特征在于，其中步骤(1)所述的雷公藤中未知的倍半萜吡啶生物碱提取为超声浸提，其中浸提溶解试剂为水、甲醇、乙氰、丙酮、氯仿或者上述溶剂的任意两者的混合溶剂，超声时间为1-5小时，然后进行过滤。

3.如权利要求1或2所述的雷公藤中未知的倍半萜吡啶生物碱快速分析方法，其特征在于，其中步骤(2)所述的利用电喷雾-四级杆-飞行时间质谱仪对已知的单一倍半萜吡啶生物碱的碎片离子进行分析，其中步骤(2)中倍半萜吡啶生物碱的碎片离子有来自于侧链断裂的，有来自于骨架断裂的，有来自于碎片之间进行加和反应的产生的。

4.如权利要求1，2或3所述的雷公藤中未知的倍半萜吡啶生物碱快速分析方法，其特征在于，其中步骤(3)所述的高效液相色谱是对步骤(1)中获得的混合物进行分离，选择C18柱，色谱柱长50-300mm，内径1-5mm，填料粒度1.0-5.0μm；柱温15-60℃；进样量2-50μl；流速0.01-1ml/min；流动相由水、甲醇或乙氰组成，在流动相中增加甲酸、乙酸、三氟醋酸、氨水、乙酸铵或氯化铵，其浓度为0.01％-10％；进行梯度或等度洗脱；电喷雾-四级杆-飞行时间质谱仪的扫描速度为50-0.1Hz；选择离子的窗口为1-20u；分辨率设为10000-20000；利用正离子模式进行分析，毛细管电压为4000-4500V；步骤(3)所述的两种方法是指分别利用恒定的与梯度的碰撞能来获得碎片离子的轮廓图，其中梯度的碰撞能与化合物的分子量成正比。

5.如权利要求1，2，3或4所述的雷公藤中未知的倍半萜吡啶生物碱快速分析方法，其特征在于，其中步骤(4)所述的通过比较已知与复杂体系中倍半萜吡啶生物碱碎片离子的轮廓图以及比较它们的特征碎片离子，来鉴别不同类型的未知倍半萜吡啶生物碱化合物，其包括：其中谱图中碎片离子m/z 206,204,或194是吡啶部分的特征离子；其中m/z 310是两个碎片离子进行加和反应产生的，该离子与侧链位置相关，可用于鉴定侧链位置；其它的碎片离子主要来自于侧链丢失；化合物分子量在800Da以上时，选择恒定能量方法更适合用于鉴定未知化合物，化合物分子量在800Da以下时，选择梯度能量方法更适合用于鉴定未知化合物。