[发明专利]一种单体系测定糖化白蛋白与白蛋白浓度比值的试剂盒

说明书

技术领域

本发明属医学检验技术领域，具体涉及一种单体系测定糖化白蛋白与白蛋白浓度比值的试剂盒。

背景技术

糖化血清白蛋白(GA)是血清白蛋白被葡萄糖糖化之后的产物，即血清白蛋白的赖氨酸残基上的ε-氨基基团被糖化。糖化白蛋白半衰期较短，测定糖化白蛋白的浓度可有效反映患者过去2～3周内平均血糖的水平，并不受临时血糖浓度波动的影响。目前，临床广泛采用测定糖化血清白蛋白(GA)与白蛋白(ALB)浓度的比值(C_GA/C_ALB)来反映较短期内糖尿病的控制程度。

自糖化血清白蛋白对糖尿病的诊断意义被临床所认识以来，已有阴离子交换层析法、高效液相色谱法、糖化氨基酸氧化酶分析法等诸多方法应用于血清GA的测定。前两种方法需要对GA进行复杂的样品前处理，同时需特殊、昂贵仪器，不适合临床常规分析。糖化氨基酸氧化酶分析法虽好，但只能单独检测GA浓度，而不能同时检测ALB浓度，从而无法直接报告C_GA/C_ALB比值。为了弥补此缺点，临床工作者常采用两个独立的体系分别检测GA和ALB浓度，即用糖化氨基酸氧化酶分析法测定GA浓度、用溴甲酚绿或溴甲酚紫比色法测定ALB浓度，再进一步求出C_GA/C_ALB比值。由于用两个独立的检测体系进行测量时影响因素多、变异系数大，得出的C_GA/C_ALB比值存在准确性不佳、重复性差的缺点。

因此，需求一种单体系测定糖化白蛋白与白蛋白比值(C_GA/C_ALB)的试剂盒，对提高检测结果的准确性和重复性显得尤为重要。

发明内容

本发明的目的是为了解决上述技术的不足，建立一种基于氨基酸氧化酶-过氧化物酶偶联、可单体系测定C_GA/C_ALB比值的新试剂盒。该试剂盒置2-8℃保存可稳定36个月，可以应用于目前广泛使用的临床生化自动分析仪，从而达到大规模测定样本的要求。

本发明的试剂盒具体组成如下：

试剂Ⅰ为含有菠萝蛋白酶、N-乙基-N-(2-羟基-3-磺丙基)-3-甲基苯胺钠盐(TOOS)、TritonX-100的pH7.0-10.0Tris缓冲液；

试剂II为含果糖氨基酸氧化酶(FAOD)、过氧化物酶(POD)、4-氨基安替比林(4-AAP)、海藻糖的pH7.0-10.0Tris缓冲液为试剂II；

试剂Ⅲ为含氨基酸氧化酶(DAO)、海藻糖的pH7.0-10.0Tris缓冲液。

在本发明的一个实施方案中，所述试剂I中，pH 7.00-10.00Tris-HCl浓度为20-200mmol/L，菠萝蛋白酶浓度为30-120KU/L、TOOS浓度为0.5-5mmol/L、TritonX-100浓度为0.5-10ml/L。

所述试剂II中，7.0-10.0Tris-HCl浓度为20-200mmol/L，FAOD浓度为20-100KU/L，POD浓度为5-30KU/L，4-AAP浓度为1.0-3.0mmol/L、海藻糖浓度为10-50g/L。

所述试剂Ⅲ中，7.0-10.0Tris-HCl浓度为20-200mmol/L，DAO浓度为200-500KU/L，海藻糖浓度为10-50g/L。

在本发明另一个实施方案中，所述试剂I中，pH 8.0-9.0Tris-HCl浓度为100-150mmol/L，菠萝蛋白酶浓度为60-90KU/L、TOOS浓度为2-4mmol/L、TritonX-100浓度为4-6ml/L。

所述试剂II中，8.0-9.0Tris-HCl浓度为100-150mmol/L，FAOD浓度为40-80KU/L，POD浓度为15-20KU/L，4-AAP浓度为1.0-3.0mmol/L、海藻糖浓度为20-40g/L。

所述试剂Ⅲ中，8.0-9.0Tris-HCl浓度为100-150mmol/L，DAO浓度为300-400KU/L，海藻糖浓度为20-40g/L。

在本发明进一步地实施方案中，所述试剂I中，菠萝蛋白酶的浓度为75KU/L、TOOS浓度为2.75mmol/L、TritonX-100的浓度为5.25ml/L、pH8.5Tris-HCl缓冲液的浓度为110mmol/L；