[发明专利]一种用制备液相法同时得到多种淫羊藿黄酮的分离方法

权利要求书

1.一种用制备液相法同时得到多种淫羊藿黄酮的分离方法，其特征在于，包括如下步骤：

S1、将淫羊藿药材粉碎，称取3Kg，置于50L提取罐中，30L70％乙醇回流提取两次，每次3h，过滤，合并滤液，得提取液；

S2、将步骤S1所得的提取液减压浓缩至1000mL，得淫羊藿粗提物浓缩液；

S3、在步骤S2所得的浓缩液中加入2000mL95％乙醇，充分搅拌，室温静置24h，过滤，将滤液浓缩至500mL后，再加入2000mL95％乙醇，充分搅拌，室温静置24h，过滤，将滤液浓缩至无醇味，过高速离心机离心，得到淫羊藿醇沉组分600mL；

S4、取步骤S3所得的淫羊藿醇沉组分，加样至己处理好的D-101型大孔树脂层析柱中；依次用3倍柱体积的蒸馏水洗脱，3倍柱体积的30％乙醇洗脱，3倍柱体积的85％乙醇洗脱，得淫羊藿总黄酮液，浓缩备用；

S5、步骤S4所得的淫羊藿总黄酮采用制备液相色谱分离，用初始流动相平衡色谱柱20min，取步骤S4所得的淫羊藿总黄酮浓缩液稀释5倍，进样，每次进样5mL，按设定梯度洗脱，紫外检测实时监控，根据峰及峰的保留时间进行收集，收集保留时间为16.72min、17.65min、18.45min、19.13min、20.48min、26.79min、27.95min和30.39min的共8个目标组分；

S6、40min以后，按照初始梯度平衡色谱柱，再次进样，收集洗脱组分；共进样5次，将5次收集得到的洗脱组分按保留时间合并相同部分，浓缩，真空离心干燥得到不同黄酮成分，所得组分依次为大花淫羊藿苷A、朝藿定A、朝藿定B、朝藿定C、淫羊藿苷Sutchuenmedin A、斯皮诺鼠李糖苷、鼠李糖淫羊藿次苷II和淫羊藿次苷II；

S7、将收集得到的各组份经HPLC检验纯度，纯度均大于98.5％。

2.根据权利要求1所述的一种用制备液相法同时得到多种淫羊藿黄酮的分离方法，其特征在于，所述步骤S3中离心机的频率为25000r/min。

3.根据权利要求1所述的一种用制备液相法同时得到多种淫羊藿黄酮的分离方法，其特征在于，所述步骤S5中色谱柱为规格10μm，250mm×50mm的c18，紫外检测波长为270nm，柱流速为60mL/min，洗脱梯度：首先用体积百分比为15％的乙腈，体积百分比为0.2％的磷酸，体积百分比为84.8％的水洗脱；再用体积百分比为30％的乙腈，体积百分比为0.2％的磷酸，体积百分比为69.8％的水洗脱；再用体积百分比为45％乙腈，体积百分比为0.2％的磷酸，体积百分比为54.8％的水洗脱，最后用体积百分比为60％乙腈，体积百分比为0.2％的磷酸，体积百分比为39.8％的水洗脱，40min完成一个分离周期。

4.根据权利要求1所述的一种用制备液相法同时得到多种淫羊藿黄酮的分离方法，其特征在于，所述步骤S7中制备柱中保留时间为20.48min及其前面的4个成分的HPLC分析条件为：规格5μm，250mm×4.6mm的c18，流动相为乙腈∶水∶磷酸30∶69.8∶0.2，检测波长为270nm，流速为1mL/min，柱温为25℃。

5.根据权利要求1所述的一种用制备液相法同时得到多种淫羊藿黄酮的分离方法，其特征在于，所述步骤S7中制备柱中保留时间在20.48min后面的3个样品的HPLC分析条件为：规格5μm，250mm×4.6mm c18，流动相为乙腈∶水∶磷酸50∶49.8∶0.2，检测波长为270nm，流速为1mL/min，柱温为25℃。