[发明专利]一种营养液及其在铁皮石斛茎段组培育苗中的应用方法

说明书

技术领域

本发明涉及组培种植技术领域，具体涉及一种营养液及其在铁皮石斛茎段组培育苗中的应用方法。

背景技术

铁皮石斛(Dendrobium officinale Kimura et Migo)为兰科石斛属多年生附生草本植物，具有滋阴补肾、润肺生津、抗肿瘤、抗衰老、增强机体免疫力等功效，为我国传统名贵中药材。道家医学经典《道藏》将铁皮石斛列为“中华九大仙草”之首，民间称其为“救命仙草”。

铁皮石斛是我国的特有珍稀濒危植物，野生分布于我国广东、云南、贵州、广西、浙江、四川等地。对生境要求特殊，生长于高山峻岭、悬崖峭壁及岩石缝隙之间，铁皮石斛的种子极小、无胚乳，自然条件下需与某些真菌共生才能萌发，很难用实生苗栽培，而传统的分株、扦插等方式的繁殖率极低，加上人们长期掠夺性、毁灭性的采挖与无计划的消耗，破坏了它们赖以生存的自然生态环境，致使其野生资源严重枯竭，被列为国家二级重点保护植物。

然而，目前铁皮石斛的市场需求量不断增长，供求矛盾进一步增大，将铁皮石斛野生变家种，利用快繁技术大规模地人工栽培以满足市场需要就成了当务之急。近20年来，我国开展了铁皮石斛人工驯化栽培研究，取得了一定的成果。但伴随着产业化的迅猛发展，我国的石斛种植还存在着诸多的突出问题，主要表现在：(1)种苗良莠不齐，组培苗分离，退化。由于铁皮石斛生产繁育基本依赖于种子扩繁的组培苗，采用种子做外植体生产的铁皮石斛试管苗，由于外植体材料遗传背景差异和培养环境的影响，试管苗植株形态特征差异明显，且在组培室中繁育后，品种分离、退化现象严重，而本发明采用茎段作外植体生产的试管苗，遗传背景相同，植株形态特征一致，保持了种源稳定性。(2)组织培养周期长，技术尚需进一步突破。传统的种子组培快繁法需要经历播种、诱导原球茎、原球茎增殖、生根壮苗等步骤，时间长达1年以上，其中播种至原球茎耗时长达5个月以上，而采用传统的茎段无性繁殖法，则可以省去播种到原球茎的步骤，直接茎段诱导原球茎，缩短了组培扩繁的时间。本发明通过改良培养基配方结合微波刺激法，可加快茎段诱导原球茎的进程，进一步缩短了生产周期，解决产业化发展对种苗的大批量需求。(3)栽培时间长，成活率低。铁皮石斛瓶苗移栽成活率通常只有60％，栽培半年以上才可移栽至苗床中。若能通过改良的营养液，使铁皮石斛种苗直接在基质苗床中进行驯化炼苗，就可以节约炼苗时间和成产成本。

发明内容

为了克服上述技术缺陷，本发明提供了一种营养液及其在铁皮石斛茎段组培育苗中的应用方法。本发明能保持母本优质性状，加快繁殖速度，可以解决实际生产中种苗良莠不齐，分离退化等问题，并提高种苗成活率及质量，有效防止病虫害。

本发明的一种营养液，由以下成分组成：500mg/L尿素、650mg/L硝酸钾、370mg/L硝酸钙、590mg/L磷酸二氢钾、320mg/L硫酸镁、85mg/L乙二胺四乙酸二钠、60mg/L硫酸亚铁、35mg/L硫酸锰、20mg/L硼酸、8mg/L硫酸锌、3.6mg/L硫酸铜、1.9mg/L钼酸钠、166mg/L三十烷醇、26mg/L萘乙酸、42g/L壳寡糖、50g/L嘧菌酯、叶片超声液和1L纯水，EC值控制在0.6左右，酸碱度pH值调至6.0；所述叶片超声液为15g/L铁皮石斛叶、5g/L金钱草、5g/L平车前、7g/L侧柏叶、10g/L茯苓、12g/L威灵仙粉碎后，加入0.8g/L竹叶抗氧化物AOB，648W超声处理30min所得溶液，即用即加。

本发明还提供了一种将本发明的上述营养液在铁皮石斛茎段组培育苗中的应用方法，该方法按照如下步骤进行：

(1)茎段消毒灭菌：选取铁皮石斛茎段，剥去叶片及叶鞘，经清水冲洗后，依次用75％酒精、0.1％氯化汞溶液进行表面消毒，并用无菌水冲洗，无菌滤纸吸干水份；

(2)原球茎诱导及增殖：将前述步骤(1)中处理后的茎段的芽点下方连带茎段部位一齐取出，接种于原球茎增殖培养基中；

(3)原球茎分化：将前述步骤(2)得到的原球茎接种于分化培养基中；

(4)生根壮苗培养：将前述步骤(3)中得到的分化出丛生苗的原球茎转瓶于生根培养基中；

(5)出瓶移栽：将前述步骤(4)中得到的生根的试管苗移入水苔基质中，1个月后移入苗床基质中栽培，喷施所述营养液。

优选的，所述步骤(2)中，采用微波法诱导原球茎：将所述步骤(2)中的所述接种于原球茎增殖培养基中的所述原球茎置于4℃环境中，暗培养3h，微波处理2min，功率500W，再置于冰块中1h，然后转移至25℃环境中，光照强度2000Lx下培养。