[发明专利]神经干细胞分化培养基及应用

说明书

技术领域

本发明属于生物化学领域，特别涉及一种神经干细胞分化培养基及方法。

背景技术

长久以来，人们一直认为成年哺乳动物脑内的神经细胞为终末分化细胞，不具备再生能力。然而，1992年，Reynodls等从成年小鼠脑纹状体中分离具有多种分化潜能的细胞群，并正式提出了神经干细胞的概念。1997年，Mckay等于《Science》杂志上概括了神经干细胞的概念：具有分化为神经元、星形胶质细胞及少突胶质细胞的能力，能自我更新并足以提供大量脑组织细胞的细胞。

神经干细胞的发现给中枢神经系统疾病的治疗带来了希望。近年来，由于这种自我更新和分化的能力，神经干细胞成为治疗神经退行性疾病和中枢神经系统损伤的研究热点。人们尝试将神经干细胞移植到大脑的病灶区，达到一定的修复作用，这一手段在帕金森氏病、亨汀顿舞蹈症和多发性硬化等中枢神经系统疾病动物模型中均得到了尝试。

然而，由于供体获得有一定难度，且神经干细胞体外分化效率低，机制不明，神经干细胞移植在临床治疗上的应用一直面临困难。因此，寻找和创建一种能够提高神经干细胞分化效率的方法具有非常重要的意义和实用价值。

Psora-4又称5-(4-苯基丁氧基)补骨脂素，英文名5-(4-Phenylbutoxy)psoralen，CAS号为724709-68-6。Psora-4是一种Kv1.3离子通道的选择性的小分子阻断剂，相对于传统的多肽阻断剂MgTX(玛格斑羯毒素)，Psora-4具有相对简单的分子结构和较低的分子质量，Psora-4对于Kv1.3离子通道的阻断作用具有高选择性，它的IC50值仅为3nM，其对Kv1.3的阻断效率是Kv1家族的其它离子通道(如Kv1.1,Kv1.2,Kv1.4和Kv1.7等)的17-70倍。此外，由于几乎不具有细胞毒性，Psroa-4已经成为目前最具潜力的Kv1.3阻断剂，而关于其在神经干细胞分化培养基中的应用，还未见相关报道。

发明内容

基于此，本发明的目的在于提供一种神经干细胞分化培养基。

解决上述技术问题的具体技术方案如下：

一种神经干细胞分化培养基，所述神经干细胞分化培养基包括有8-18nM的化合物Psora-4。

在其中一些实施例中，所述神经干细胞分化培养基包括有8-15nM的化合物Psora-4。

在其中一些实施例中，所述神经干细胞分化培养基包括有9-11nM的化合物Psora-4。

在其中一些实施例中，所述神经干细胞分化培养基是由F12-DMEM、N2、B27、BDNF、cAMP和Psora-4组成的，其中，所述神经干细胞分化培养基中N2、B27、BDNF、cAMP和Psora-4的终浓度分别为：0.7-1.2％v/v、1.5-2.5％v/v、8-12ng/ml、0.8-1.2μM和8-18nM。

在其中一些实施例中，所述神经干细胞分化培养基中N2、B27、BDNF、cAMP和Psora-4的终浓度分别为：0.9-1.1％v/v、1.9-2.1％v/v、9-11ng/ml、0.9-1μM和8-15nM。

在其中一些实施例中，所述神经干细胞分化培养基中N2、B27、BDNF、cAMP和Psora-4的终浓度分别为：0.9-1.1％v/v、1.9-2.1％v/v、9-11ng/ml、0.9-1μM和9-11nM。

本发明的另一发明目的为提供Psora-4在制备促进神经干细胞分化、新神经元成熟的神经干细胞分化培养基中的应用。

本发明的另一发明目的为提供一种神经干细胞分化的方法，将神经干细胞在神经干细胞增殖培养基中利用基质使细胞贴壁完全后，再采用上述神经干细胞分化培养基进行培养。

本发明所述的一种神经干细胞分化培养基及其应用具有以下优点和有益效果：

经发明人的大量实验和研究，得出在常规神经干细胞分化培养基中添加特定量的Psora-4所制得的培养基，可显著提高神经干细胞分化成为神经元的比例，还可以显著提高神经元的成熟度，即该种培养基具有促进神经干细胞分化、新神经元成熟的优点。

附图说明

图1为小鼠神经干细胞分化流程图；

图2为含有Psora-410nM的分化培养基显著提高神经元比例和多突触神经元比例的结果图；(A)神经干细胞分化5天后的细胞免疫荧光染色图；(B)神经干细胞分化而来的细胞中，神经元比例呈Psora-4的浓度依赖性。其中10nM浓度下，神经元比例显著提高；(C)Psora-4显著提高多突触新生神经元的百分比；