[发明专利]一种应用于TTC法测定根系活力的乙酸乙酯回收利用的方法

说明书

技术领域

本发明涉及一种应用于TTC法测定根系活力的乙酸乙酯回收利用的方法。

技术背景

植物根系活力测定是植物生理学实验的常用方法，广泛用于作物、牧草、园艺植物、园林植物等各种植物科学研究。

TTC法测定根系活力的原理：氯化三苯基四氮唑(TTC)是标准氧化电位为80mV的氧化还原色素，溶于水中成为无色溶液，但还原后即生成红色而不溶于水的三苯甲腙(TTF)，生成的三苯甲腙比较稳定，不会被空气中的氧自动氧化，所以TTC被广泛地用作酶试验的氢受体，植物根系中脱氢酶所引起的TTC还原，TTC还原量能表示脱氢酶活性并作为根系活力的指标。将根系放在质量分数为0.4％的TTC中，在37℃保温3～6h，把根取出，吸干水分后与乙酸乙酯3～4ml和少量石英砂一起在研钵内磨碎，以提出三苯甲腙(TTF)。红色提取液移入试管，并用少量乙酸乙酯把残渣洗涤二、三次，皆移入试管，最后加乙酸乙酯使总量为10ml，用分光光度计在波长485nm下比色，以空白试验作参比测出吸光度，查标准曲线，即可求出四氮唑还原量。但是TTC法测定根系活力时产生的废液量大，直接倒掉对环境污染严重，试验成本高。

发明内容

本发明是为了解决目前TTC法测定根系活力时产生的废液量大，直接倒掉对环境污染严重，试验成本高的技术问题，而提供一种应用于TTC法测定根系活力的乙酸乙酯回收利用的方法。

本发明的一种应用于TTC法测定根系活力的乙酸乙酯回收利用的方法是按以下步骤进行的：

一、脱色：向用TTC法测定完根系活力后的乙酸乙酯废液中加入活性炭，用震荡仪震荡2min，得到溶液Ⅰ；所述的用TTC法测定完根系活力后的乙酸乙酯废液的体积与活性炭的质量比为1mL:0.01g；

二、过滤：将步骤一得到的溶液Ⅰ采用中速定性滤纸进行过滤1次，得到乙酸乙酯回收液。

TTC法测定根系活力的方法步骤为：

1、TTC标准曲线的制作：取质量分数为0.4％的TTC溶液0.2ml放入10ml量瓶中，加少许Na₂S₂O4粉摇匀后立即产生红色的甲月替。再用乙酸乙酯定容至刻度，摇匀。然后分别取此液0.25ml、0.50ml、1.00ml、1.50ml、2.00ml置10ml容量瓶中，用乙酸乙酯定容至刻度，即得到含甲月替25μg、50μg、100μg、150μg、200μg的标准比色系列，以空白作参比，在485nm波长下测定吸光度，绘制标准曲线；

2、称取根尖样品0.1g～0.5g，放入10ml烧杯中，加入质量分数为0.4％的TTC溶液和磷酸缓冲液的等体积混合液10ml，把根充分浸没在溶液内，在37℃下暗保温1～3h，此后加入浓度为1mol/L的硫酸2ml，以停止反应。(与此同时做一空白实验，先加硫酸，再加根样品，其他操作同上)；

3、把根取出并吸干水分后与3～4ml的乙酸乙酯和少量石英砂一起在研钵内磨碎，以提出甲月替。红色提取液移入试管，并用少量乙酸乙酯把残渣洗涤二、三次，皆移入试管，最后加乙酸乙酯使总量为10ml，用分光光度计在波长485nm下比色，以空白试验作参比测出吸光度，然后得到用TTC法测定完根系活力后的乙酸乙酯废液；查标准曲线，即可求出四氮唑还原量。

本发明优点：

一、本发明可以减少用TTC法测定完根系活力后的乙酸乙酯废液对环境的污染，提高了有机溶剂的利用率，降低实验成本；

二、本发明具有操作简单、处理量大、易于人工掌握等特点，对进行植物生理特性研究具有一定应用价值；

三、本发明方法能够回收利用根系活力测定用乙酸乙酯溶液，活性炭处理乙酸乙酯回收率：85％；回收利用次数：5次；。并且适用于大量样品的处理。

具体实施方式：

具体实施方式一：本实施方式是一种应用于TTC法测定根系活力的乙酸乙酯回收利用的方法，具体是按以下步骤进行的：

一、脱色：向用TTC法测定完根系活力后的乙酸乙酯废液中加入活性炭，用震荡仪震荡2min，得到溶液Ⅰ；所述的用TTC法测定完根系活力后的乙酸乙酯废液的体积与活性炭的质量比为1mL:0.01g；

二、过滤：将步骤一得到的溶液Ⅰ采用中速定性滤纸进行过滤1次，得到乙酸乙酯回收液。

本实施方式优点：

一、本实施方式可以减少用TTC法测定完根系活力后的乙酸乙酯废液对环境的污染，提高了有机溶剂的利用率，降低实验成本；