[发明专利]淫羊藿破壁饮片的指纹图谱共有模式构建及其质量检测方法

说明书

技术领域

本发明涉及中药饮片的建立检测方法，尤其是淫羊藿破壁饮片HPLC指纹图谱共有模式构建及其质量检测方法。

背景技术

淫羊藿为小檗科植物淫羊藿Epimediumbrevicornu Maxim、箭叶淫羊藿Epimediumsagittatum(Sie.et Zucc.)、柔毛淫羊藿EpimediumpubescensMaxim.或朝鲜淫羊藿EpimediumkoreanumNakai的干燥叶。本发明中的淫羊藿针对小檗科植物淫羊藿Epimediumbrevicornu Maxim品种。

主要成分为黄酮、木脂素、生物碱和多糖。黄酮类成分主要有：淫羊藿苷，朝藿定A、朝藿定B、朝藿定C、宝藿苷Ⅰ、Ⅱ，淫羊藿次苷Ⅰ、Ⅱ，大花淫羊藿苷A，鼠李糖基淫羊藿次苷Ⅱ，箭藿苷A、B、C和金丝桃苷等。

中药破壁饮片是利用现代超微粉碎技术将传统饮片进行破细胞壁粉碎成粒度分布D90小于45μm的微细颗粒，再制成30～100目的颗粒。相对于传统饮片具有色泽一致，质量均一，稳定性好的特点为创新型中药饮片。由于中药破壁饮片不具传统中药饮片的形态特征，破壁后会带来有效成分或指标成分等化学成分的溶出度变化，使传统饮片的鉴别、质量检测方法不能完全适用。因此，必须针对中药破壁饮片建立专属性强，全面反映中药破壁饮片质量状况的检测方法。而建立一项新的质量检测方法并非易事，例如检测条件、对照品的选择和供试品的制备方法等均需要研究考量并进行验证。虽然现有技术中有涉及中药指纹图谱的检测方法，但并无针对形态特殊的中药破壁饮片的方法，且存在专属性、稳定性、重现性和精密度差缺陷，不能全面反应饮片质量的缺陷。

发明内容

本发明提供了一种淫羊藿破壁饮片HPLC标准指纹图谱的构建及其质量检测方法。

淫羊藿破壁饮片HPLC标准指纹图谱的构建方法包括以下步骤：

(1)供试品溶液的制备：精密称定淫羊藿破壁饮片0.200g，加入50％稀乙醇20mL，超声提取30min，冷却至室温，1200r/min离心5min,上清液倾入20ml量瓶中，加50％稀乙醇稀释并定容至20ml，摇匀，0.22um微孔滤膜过滤备用；

(2)对照品配制：精密称取淫羊藿苷对照品适量，加甲醇溶解配制成浓度分别为0.116mg/ml的混合对照品溶液；

(3)色谱条件与系统适用性试验：以十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂的色谱柱，以乙腈为流动相A，水溶液为流动相B，梯度洗脱：0min-20min-28min-60min，流动相A:20％-27％-27％-50％；柱温为35℃；检测波长为272nm；流速：0.8mL/min；

(4)测定法：精密吸取供试品溶液20μl，对照品10ul注入色谱仪，测定，记录图谱，即得；

(5)按上述供试品溶液及对照品的制备方法及和色谱条件对10批以上的淫羊霍破壁饮片样品进行HPLC分析，得到相应指纹图谱；以淫羊藿苷峰为参照峰，计算各指纹图谱中主要色谱峰的相对保留时间及相对峰面积；输入指纹图谱分析软件，对各批次样品指纹图谱进行相似度比较，以平均谱图为共有模式，计算相似度，建立淫羊藿破壁饮片指纹图谱共有模式标准图谱如图3所示，包括16个特征峰。

淫羊藿破壁饮片的质量检测方法包括以下步骤：

(1)按上述标准图谱构建方法中步骤(1)和步骤(2)分别制备待测样品供试品溶液和对照品溶液，按步骤(3)的色谱条件，精密吸取待测样品供试品溶液20μl，淫羊藿苷对照品10ul，注入HPLC色谱仪，测定，记录色谱，即得；

(2)合格指标的建立及指定图谱、判断方法：供试品色谱中，应呈现16个与图3-淫羊藿破壁饮片HPLC指纹图谱共有模式相对应的特征峰。按中药色谱指纹图谱相似度评价系统计算，供试品指纹图谱与对照指纹图谱的相似度不得低于0.90。以淫羊藿苷峰为对照峰，其余15个共有指纹峰的相对保留时间分别为0.248、0.507、0.691、0.772、0.829、0.875、0.931、0.966、1.128、、1.262、1.458、1.652、1.667、1.781、1.832，各峰相对保留时间RSD≤±5％，为合格品。