[发明专利]基于LSPR检测精子顶体酶活性的方法、试剂盒及其应用

权利要求书

1.一种基于LSPR检测精子顶体酶活性的试剂盒，其特征在于包含：

功能化纳米金标记精子顶体酶底物，包含纳米金以及通过化学键合和/或物理吸附方式固定在纳米金表面的精子顶体酶底物，所述纳米金选自纳米金棒、纳米金球或纳米金立方块，其中纳米金棒的直径为20nm、长度为30nm～50nm，纳米金球的粒径为30～120nm，纳米金立方块的边长为10nm～100nm；

适于使所述精子顶体酶底物与精子顶体酶专一结合并进行反应的缓冲液；以及，

记载有所述试剂盒的使用方法的说明书，所述的使用方法包括：

控制主要由所述缓冲液和均匀分散在所述缓冲液内的功能化纳米金标记精子顶体酶底物组成的混合溶液的浓度，使所述混合溶液在300-1000nm波长范围内的吸收峰的峰值在0.6-0.8之间；测定所述混合溶液在300-1000nm波长范围内的吸收光谱，并记录吸收峰对应的吸收波长λ₀以及吸收峰强度A₀；

在所述混合溶液中加入不同浓度C_n的精子顶体酶溶液，并分别测定在加入不同浓度的精子顶体酶标准溶液之后所获的不同混合反应体系在300-1000nm波长范围内的吸收光谱，记录吸收峰对应波长λ_n和吸收峰值A_n，波长偏移值记为Δλ_n＝λ_n-λ₀，吸收峰偏移值记为ΔA_n＝A_n-A₀，探知C_n与Δλ_n或ΔA_n成正比，并由此建立精子顶体酶溶液浓度与波长偏移值或吸收峰偏移值的标准工作曲线，其中n为大于或等于2的自然数；

以及，在所述混合溶液中加入未知浓度C_x的精子顶体酶溶液，并测定由此形成的混合反应体系在300-1000nm波长范围内的吸收波长λ_x，波长偏移值Δλ_x＝λ_x-λ₀或吸收峰偏移值ΔA_x＝A_x-A₀，并依据所述标准工作曲线而计算出C_x。

2.根据权利要求1所述的试剂盒，其特征在于：所述精子顶体酶底物通过与修饰在纳米金表面的选定官能团发生偶联反应而固定连接到所述纳米金表面，所述选定官能团来源于两亲性超支化分子，所述两亲性超支化分子包括聚苯乙烯-b-聚丙烯酸,或聚苯乙烯-b-聚乙烯醇。

3.一种精子顶体酶活性的检测装置，其特征在于包含权利要求1-2中任一项所述的试剂盒。