[发明专利]吸附大环内酯类抗生素的免疫亲和搅拌棒及其制备方法与应用

说明书

技术领域

本发明属于食品安全检测技术领域，涉及一种免疫亲和搅拌棒及其制备方法与应用。

背景技术

随着我国经济的发展，人们生活水平的日益提高，对各种动物源性食品的需求量也逐渐增大，食品安全问题自然成为大家关注的焦点。近年来关于兽药残留引起的对人身体健康造成危害的报道屡见不鲜，相关食品安全部门也致力于检测方法的研究。由于生物样品的成分复杂、药物与样品成分之间易互相结合和残留药物浓度低等均给样品中药物的提取净化带来了很大的困难，因此分析方法的选择性和灵敏度直接决定了检测的成功与否。

免疫亲和搅拌棒（Imunoaffinity stir bar）是免疫亲和固相微萃取（Immunoaffinity solid phase microextraction, Immunoaffinity SPME）的一种装置形式，将固相微萃取（Solid phase microextraction, SPME）与免疫亲和色谱（IAC,immunoaffinity chromatography）相结合，既具有SPME易于操作、使用溶剂少和节省时间的优点，又有免疫亲和色谱高度选择性和高亲和性的特点，使SPME在兽药残留分析中，选择性、亲和性和灵敏度方面得到了很大的提升。Immunoaffinity stir bar常被用作样品的萃取，尤其适用于复杂基质中痕量分析物的提取，与多种检测手段结合使用进行分析测定，具有广阔的应用前景。

泰乐菌素(Tylosin)，亦称泰农、泰乐霉素，是美国于1959年从弗氏链霉菌(Streptomyces fradiae)的培养液中获得的一种大环内酯类抗生素。泰乐菌素为一种白色板状结晶，微溶于水，呈碱性。产品有酒石酸盐、磷酸盐、盐酸盐、硫酸盐及乳酸盐，易溶于水。替米考星（Tilmicosin），是由泰乐菌素的一种水解产物半合成的畜禽专用抗生素，通常用其磷酸盐。

泰乐菌素和替米考星均为大环内酯类抗生素，在兽医临床上被广泛用于治疗畜禽支原体、革兰氏阳性菌和革兰氏阴性菌所引起的感染性疾病。由于其抗菌谱广、吸收和排泄速度快、均有良好的扩散能力和显著的促生长作用，已倍受养殖户的青睐。但是当养殖户过量或者不当使用这些抗生素时，会造成药物在食品动物中残留。抗生素及其代谢产物在动物组织和器官内蓄积到一定浓度，人食用后会对健康造成很大的影响。可对前庭和耳蜗神经造成损伤，导致眩晕和听力减退，甚至会严重损害肝、肾和造血系统。

近几十年来，各种食品安全监测机构、各类从事相关工作的研究人员针对食品和饲料中泰乐菌素和替米考星的残留分析进行了深入全面的研究。目前用于两种药物检测的主要技术有：酶联免疫吸附分析( ELISA）、气相色谱法（GC）、和气相色谱-质谱联用分析法（GC/MS）及高效液相色谱（HPLC）等方法。ELISA 法主要用于半定量快速筛选; GC和GC/MS由于需衍生化, 操作较为麻烦; HPLC 分析较准确且过程相对较简便, 但检测限比较高。本由于样品基质成分复杂，在萃取过程中很容易将待测药物与其他性质相似的成分一起提取出来，给检测造成困难。因此，在检测之前“净化”工作是必不可少的，通常采用净化方法主要有液-液萃取（LLE）和固相萃取（SPE）。LLE过程需要使用大量有机溶剂，而一些有机溶剂性质稳定，不易降解，对环境造成污染，而且操作繁琐。SPE操作简单、省时，但特异性不强是其主要的缺点。Immunoaffinity SPME技术首次于2001年被提出，用Immunoaffinity stir bar净化大环内酯类抗生素目前还尚未见报道，更无商品化的Immunoaffinity stir bar出售。

发明内容

本发明的目的是提供一种吸附2种大环内酯类药物的免疫亲和搅拌棒及其制备方法。

为实现上述目的，本发明公开了如下的技术内容：

一种吸附大环内酯类抗生素的免疫亲和搅拌棒，其特征在于是由固相载体和与其偶联的泰乐菌素鼠单克隆抗体组成，其中固相载体与偶联的泰乐菌素鼠单克隆抗体的偶联长度与重量比为1 cm：2 mg；所述的单克隆抗体是由单克隆杂交瘤细胞株TYL-4E2注入小鼠腹腔，纯化小鼠腹水得到的；所述的固相载体为10 cm×4 mm玻璃棒，偶联抗体的有效长度为2.5 cm。

单克隆杂交瘤细胞株TYL-4E2的解释如下：

 TYL-4E2中TYL代表泰乐菌素，4代表细胞融合过程使用第4块96孔板，E2中的字母和数字分别代表96孔板的横纵编号，96孔板中1-12为横向编号，A-H为纵向编号。E2代表融合后的杂交瘤细胞株在96孔板中的位置。