[发明专利]一种源于带鱼鱼肉蛋白的铁螯合肽及其制备方法和用途

说明书

本发明涉及一种源于带鱼鱼肉蛋白的铁螯合肽的制备方法，具体讲是以带鱼鱼肉为原料，利用木瓜蛋白酶和胰蛋白酶对带鱼鱼肉蛋白进行酶解，采用超滤、大孔树脂柱层析、凝胶柱层析和反相高效液相色谱分离纯化得到铁螯合肽Ala‑Pro‑Pro‑Glu‑Asn‑Gly‑Met‑Ala‑Gln‑Met，ESI/MS测定分子量为1045.18 Da。带鱼鱼肉蛋白铁螯合肽由于其独特的螯合和转运机制，吸收利用度高，又可同时补充多肽/氨基酸和铁，是一种理想的补铁物质。

技术领域

本发明涉及一种源于带鱼鱼肉蛋白铁螯合肽及其制备方法，属于水产品精深加工技术领域。

背景技术

生物活性肽是指那些有特殊生理活性的肽类，是当前药物及保健品研究的热点。目前，通过蛋白酶解生产的活性肽主要来源于陆地的蛋白源，海洋生物生存环境明显区别于陆地环境，其蛋白质的氨基酸组成或序列都与陆地生物蛋白有很大的不同，在种类和数量上也远远超过陆源蛋白资源。因此，借鉴陆地活性肽开发的酶工程技术，以海洋生物蛋白资源为原料，通过对制备工艺的综合研究，将研制出陆地蛋白源和化学合成所无法生产的系列天然、高效、新颖的生物活性肽。

铁是人类的必须的微量元素，对婴幼儿和儿童的生长发育至关重要。大分子蛋白质虽然也可以与铁离子结合，但铁螯合蛋白质分子量大，难以通过肠黏膜，不利于铁离子的吸收。而现有的研究表明，铁螯合肽可以大大提高铁离子的吸收利用率，同时多肽也具有多种显著的生物活性，表现出双重功效。

基于此，本发明根据铁螯合肽和带鱼鱼肉蛋白多肽的研究现状，提供一种源于带鱼鱼肉蛋白的铁螯合肽，并提供这种铁螯合肽的制备方法。

发明内容

本发明所要解决的第一个技术问题是针对上述的技术现状提供一种源于带鱼鱼肉蛋白的铁螯合肽。

本发明所要解决的第二个技术问题是提供一种源于带鱼鱼肉蛋白的铁螯合肽的制备方法。

本发明为解决上述第一个技术问题所采取的技术方案为：一种源于带鱼鱼肉蛋白的铁螯合肽，其特征在于该多肽的氨基酸序列为Ala-Pro-Pro-Glu-Asn-Gly-Met-Ala-Gln-Met（APPENGMAQM），ESI/MS测定分子量为1045.18 Da。

本发明为解决上述第二个技术问题所采取的技术方案为：一种源于带鱼鱼肉蛋白的铁螯合肽的制备方法，其特征在于包括以下步骤：

1）带鱼鱼肉的预处理：将洗净、去骨和皮的带鱼鱼肉按照固液比1 g:2 mL ~3mL放入磷酸盐缓冲液（0.02 mol/L，pH 6.5）中，用高速组织捣碎机将其处理成匀浆，然后按照体积比1:3~ 5mL放入乙醚中脱脂4 ~ 6 h，4 ℃、5000 ~ 6000 rpm，15 ~ 20 min离心除去乙醚，沉淀物冷冻干燥即为脱脂带鱼鱼肉。

）带鱼鱼肉蛋白的酶解：按照料液比1g:20~25 mL向脱脂带鱼鱼肉中加入磷酸盐缓冲液（0.02 mol/L，pH 6.5），按照脱脂带鱼鱼肉质量的1.5~2.5%向溶液中加入木瓜蛋白酶（酶活力≥2.0×10⁴ U/g），于温度55~65℃下酶解4~6 h后，将溶液升温至90℃~ 95℃，并于此温度保持10~15min后，冷却至室温；用NaOH调溶液pH到7.5~8.5，按照蛋白质量的1.5 ~2.0%向溶液中加入胰蛋白酶（酶活力≥2.5×10⁴ U/g），于温度35~45℃下酶解3~4 h，得酶解产物；

3）带鱼鱼肉蛋白铁螯合肽的制备：将制备的带鱼鱼肉蛋白酶解产物采用3 kDa超滤膜进行超滤处理，收集分子量小于3 kDa部分，得超滤酶解液，超滤酶解液按照体积比加入到装有10～15倍AB-8大孔树脂的层析柱中，用3～5倍柱体积水洗脱除去杂质，然后用5～8倍柱体积的95%乙醇进行洗脱，乙醇洗脱液于50 ℃以下低压旋蒸除去乙醇、冷冻干燥得多肽混合物，多肽混合物依次经凝胶柱层析和反相高效液相色谱（RP-HPLC）纯化，得到带鱼鱼肉蛋白铁螯合肽。