[发明专利]一种金枪鱼鱼骨胶原蛋白源锌螯合胶原肽及其制备方法和用途

说明书

本发明涉及一种金枪鱼鱼骨胶原蛋白的锌螯合胶原肽的制备方法，具体讲是以金枪鱼鱼骨为原料，采用酸法提取胶原蛋白，利用胃蛋白酶和胰蛋白酶对胶原蛋白进行酶解，采用超滤、大孔树脂柱层析、凝胶柱层析和反相高效液相色谱分离纯化得到锌螯合胶原肽Gly‑Lys‑Thr‑Gly‑Trp‑Pro‑Gly（GKTGWPG），ESI/MS检测分子量为701.73 Da。锌螯合胶原肽由于其独特的螯合和转运机制，吸收利用度高，又可同时补充多肽/氨基酸和锌，是一种理想的补锌物质。

技术领域

本发明涉及一种金枪鱼鱼骨胶原蛋白源锌螯合胶原肽及其制备方法和用途，属于水产品精深加工技术领域。

背景技术

胶原肽以其在医药、保健品、食品和化妆品等应用上的独特功效被越来越多的消费者所青睐，使其成为食品行业和保健品行业、日化行业所竞相关注的焦点。锌是人体必须的微量元素, 其缺乏可导致儿童生长发育不良、智力发育落后、免疫力降低等病症。传统的锌补充剂（如葡萄糖酸锌、柠檬酸锌）稳定性差，吸收利用率低，肠胃刺激大，不易长期服用。而锌与金属螯合肽形成的螯合盐，即可促进微量元素的吸收，同时又能满足机体对活性肽、氨基酸等的需求，得到了国内外学者的广泛关注。

金枪鱼是远洋渔业的重要鱼类，年捕获量超过600万吨。金枪鱼加工过程中，占总重量25%−30%鱼骨多数加工成鱼骨粉或者作为废弃物丢掉，浪费的宝贵的渔业资源。经检索，以金枪鱼鱼骨胶原蛋白制备锌螯合胶原肽未见报道。基于此，本发明根据锌螯合胶原肽和金枪鱼鱼骨的研究现状，提供一种具有金属锌螯合活性的胶原肽，并提供这种锌螯合胶原肽的制备方法。

发明内容

本发明所要解决的第一个技术问题是针对上述的技术现状提供一种源于金枪鱼鱼骨胶原蛋白的锌螯合胶原肽。

本发明所要解决的第二个技术问题是提供一种源于金枪鱼鱼骨胶原蛋白的锌螯合胶原肽的制备方法。

本发明为解决上述第一个技术问题所采取的技术方案为：一种源于金枪鱼鱼骨胶原蛋白的锌螯合胶原肽，其特征在于该胶原肽的氨基酸序列为Gly-Lys-Thr-Gly-Trp-Pro-Gly（GKTGWPG），ESI/MS检测分子量为701.73 Da。

本发明为解决上述第二个技术问题所采取的技术方案为：一种源于金枪鱼鱼骨胶原蛋白的锌螯合胶原肽的制备方法，其特征在于包括以下步骤：

1）金枪鱼鱼骨的预处理：按照料液比1 g:10~15 mL向金枪鱼鱼骨中加0.1 mol/LNaOH溶液于4℃下浸泡3~5 h，脱除非胶原蛋白；处理后鱼骨用蒸馏水反复洗涤至pH 6.5~7.0、沥干，按照料液比1 g: 5~10 mL加入0.5 mol/L EDTA溶液（pH 7.4），于4℃下浸泡3~5天，每天更换1次EDTA溶液，脱除鱼骨中的钙，干燥、粉碎，得脱钙鱼骨粉。

2）金枪鱼鱼骨胶原蛋白的制备：按照料液比1 g:3~5 mL向脱钙鱼骨粉加入0.5mol/L乙酸溶液并在4℃下浸泡2~3 d，12 000 g离心30 min后取上清液，加入NaCl至溶液终浓度为0.8~1.0 mol/L，静置30~60 min，15 000 g离心25~30 min得沉淀物，冷冻干燥即为鱼骨胶原蛋白。

）金枪鱼鱼骨胶原蛋白的酶解：按照料液比1g:15~20 mL向胶原蛋白中加入超纯水，用HCl调溶液pH到1.5~2.5，按照胶原蛋白质量的1.5~2.0%向胶原蛋白溶液中加入胃蛋白酶（酶活力≥1.6×10⁵ U/g），酶解3~5 h后，将溶液升温至90 ℃~ 95℃，并于此温度保持10~15min后，冷却至室温；用NaOH调溶液pH到7.5~8.5，按照胶原蛋白质量的1.2 ~1.5%向溶液中加入胰蛋白酶（酶活力≥2.5×10⁴ U/g），于温度35~45℃下酶解3~4 h，得酶解产物；