[发明专利]一种检测猫传染性鼻气管炎病毒的试剂盒及方法

权利要求书

1.一种检测猫传染性鼻气管炎病毒的试剂盒，其特征在于含有：

（1）特异性引物，其中上游引物的序列如SEQ ID NO：1所示，下游引物的序列如SEQ ID NO：2所示；

（2）特异性探针，其序列如SEQ ID NO：3所示，在特异性探针的5’设计有荧光物质FAM，在特异性探针的3’设计有带有淬灭物质TAMRA。

2.如权利要求1所述的一种检测猫传染性鼻气管炎病毒的试剂盒，其特征在于：所述试剂盒中还包括选自以下的试剂：DNA提取试剂、Taq酶、PCR缓冲液、DNA聚合酶中的任意一种或者一种以上的组合。

3..采用权利要求1所述的试剂盒检测猫传染性鼻气管炎病毒的方法，其特征在于包括如下步骤：

1）一个样本处理的步骤，从样本中提取DNA；

2）一个荧光PCR的步骤，按照检测样品数n（n=待检样品数+2）取荧光PCR试剂、上下游引物和探针混于一离心管中，于振荡器上振荡，按每管分装，盖上管盖备用，将阴性对照液加入一个分装管中，取各样本的DNA加入对应反应管中；最后取出阳性对照加入另一反应管中，各反应管标记后离心，取出置荧光PCR仪中，荧光信号在60℃时收集，检测通道：FAM；

3）一个结果判定的步骤，若样品Ct值＞35或无数值的标本为阴性；若样品Ct值≤30的标本为FHV-1阳性样品；若30＜Ct值≤35的样本建议重做，重做结果Ct值为none为阴性，否则为阳性。

4.如权利要求3所述的检测猫传染性鼻气管炎病毒的方法，其特征在于：荧光PCR反应条件：95℃，30s；40个循环，95℃，5s；60℃，34s。

5.如权利要求3所述的检测猫传染性鼻气管炎病毒的方法，其特征在于： 荧光PCR试剂由2×TaqMan Master Mix商品化试剂替代。

6.如权利要求3所述的检测猫传染性鼻气管炎病毒的方法，其特征在于：上述的检测方法还包括一个如下的质控标准：

（1）阴性对照的Ct值应等于none；

（2）阳性对照的Ct值应≤30，否则，此实验视为无效；

（3）应该同时满足上述2项条件，否则试验无效。

7.如权利要求3所述的检测猫传染性鼻气管炎病毒的方法，其特征在于：上游引物FHV-1F的序列如SEQ ID NO：1所示，下游引物FHV-1R的序列如SEQ ID NO：2所示。

8.如权利要求3所述的检测猫传染性鼻气管炎病毒的方法，其特征在于：特异性探针的序列如SEQ ID NO：3所示，在探针的5’设计有荧光物质FAM，在探针的3’设计有带有淬灭物质TAMRA。

9..权利要求1所述试剂盒用于从待测样品中检测猫传染性鼻气管炎病毒。