[发明专利]多噬菌体裂解酶基因的共表达体系、构建方法、携载体系的活疫苗、活疫苗的制备及其应用

权利要求书

1.一种多噬菌体裂解酶基因的共表达体系，其特征在于：以真核表达质粒为表达载体，同时携载LysinA、LysinB以及Holin裂解酶基因，同时表达三种靶向结核杆菌的噬菌体裂解酶基因的共表达体系。

2.如权利要求1所述的多噬菌体裂解酶基因的共表达体系，其特征在于：所述共表达体系是通过将LysinA、LysinB以及Holin基因片段定向插入含有分枝杆菌属OriM复制子的质粒框架中而获得的。

3.如权利要求1所述的多噬菌体裂解酶基因的共表达体系，其特征在于：所述共表达体系是通过将获得的LysinA基因片段、LysinB-Holin基因片段定向插入含有分枝杆菌属OriM复制子的质粒框架中而获得的。

4.如权利要求3所述的多噬菌体裂解酶基因的共表达体系，其特征在于：所述共表达体系是通过将获得的LysinA基因片段、LysinB-link-Holin融合基因片段定向插入含有分枝杆菌属OriM复制子的质粒框架中而获得的。

5.构建如权利要求1所述的多噬菌体裂解酶基因的共表达体系的方法，其特征在于：先用PCR扩增技术分别获得OriM复制子基因片段、LysinA基因片段、LysinB基因片段与Holin基因片段，以真核表达质粒为框架质粒，将测序正确的分枝杆菌属OriM复制子插入所述框架质粒的Nhe I酶切位点，将测序正确的LysinB-Holin基因片段插入所述框架质粒的Hind Ⅲ和Xba Ⅰ之间，将测序正确的LysinA基因片段插入所述框架质粒的Not Ⅰ和BstB Ⅰ之间，获得了同时携载LysinA、LysinB以及Holin裂解酶基因，同时表达三种靶向结核杆菌的噬菌体裂解酶基因的共表达体系。

6.如权利要求5所述的多噬菌体裂解酶基因的共表达体系的构建方法，其特征在于：先用PCR扩增技术分别获得OriM复制子基因片段、LysinA基因片段、LysinB基因片段与Holin基因片段，将LysinB与Holin基因片段用疏水甘氨酸接头编码序列拼接获得LysinB-link-Holin融合基因片段，将测序正确的分枝杆菌属OriM复制子插入所述框架质粒的Nhe Ⅰ酶切位点，将测序正确的LysinB-link-Holin融合基因片段插入所述框架质粒的Hind Ⅲ和Xba Ⅰ之间，将测序正确的LysinA基因片段插入所述框架质粒的Not Ⅰ和BstB Ⅰ之间，获得了同时携载LysinA、LysinB以及Holin裂解酶基因，同时表达三种靶向结核杆菌的噬菌体裂解酶基因的共表达体系。

7.如权利要求5或者6所述的多噬菌体裂解酶基因的共表达体系的构建方法，其特征在于：所述真核表达质粒含有2个多克隆酶切位点区域，两个独立的启动子。

8.携载多噬菌体裂解酶基因共表达体系的重组治疗性结核活疫苗，其特征在于：以具有巨噬细胞良好靶向性的耻垢分枝杆菌或经过基因改造的重组BCG为活载体，携载如权利要求1所述的表达三种靶向结核杆菌的噬菌体裂解酶基因的共表达体系的重组活疫苗。

9.制备如权利要求8所述的携载多噬菌体裂解酶基因共表达体系的重组治疗性结核活疫苗的方法，其特征在于：以具有巨噬细胞良好靶向性的耻垢分枝杆菌或经过基因改造的重组BCG为活载体，将同时携载LysinA、LysinB以及Holin裂解酶基因的共表达体系电转化入耻垢分枝杆菌或经过基因改造的重组BCG活载体中，然后通过体外扩增，得到所述重组治疗性结核活疫苗。

10.如权利要求8所述的携载多噬菌体裂解酶基因共表达体系的重组治疗性结核活疫苗在治疗增殖性结核杆菌、休眠性结核杆菌与耐药性结核杆菌引起的活动性结核或潜伏结核感染领域的应用。