[发明专利]一种测定茄子种子生活力的四唑染色方法

说明书

技术领域

本发明属于种子发芽能力的测定领域，特别涉及一种测定茄子种子生活力的四唑染色方法，该染色方法将茄子种子于TTC染色液中进行染色处理。

背景技术

种子的生活力是种子质量的重要指标，是种用价值的主要组成部分，它与种子田间出苗率密切相关，是反映种子生命过程中十分重要的特性之一。种子生活力测定也是快速鉴定种子发芽能力的一种间接方法，准确的生活力测定方法能够真实反映种子的发芽能力和最大发芽潜力，尤其对一些休眠期长的种子更为适用。由于采用常规的发芽试验来测定发芽力需要的时间较长，而种子寿命长短各异，为了确定种子是否能用于播种及确定播种量，有必要进行种子生活力的高效测定。因此，研究不同种子生活力适宜的测定方法就具有重要意义(史周华和张雪飞，2009)。种子生活力测定是国内外农作物生产上非常重视和关注的内容之一。种子生活力的快速测定法主要有四唑(2,3,5-氯化三苯基四氮唑；2,3,5-Triphenyl tetrazolium chloride,TTC)染色法，溴麝香草酚兰(BTB)法和紫外荧光法等，其中以TTC染色法应用最广。其原理为有生活力的种子胚细胞含有脱氢酶，具有脱氢还原作用，被种子所吸收的无色TTC接受了活种子呼吸过程中脱氢酶产生的氢，而变成还原态的红色稳定不扩散物质，即不溶于水的三苯基甲腙(TTF)，而无生活力的种子则无此反应，故无染色出现，由此可按胚组织的染色情况区分有生活力的种子和无生活力的种子。

TTC测定于1942年由德国Socaled Hoheneim学校的H.Lakon教授发明，第二次世界大战期间传入美国。随着世界TTC测定技术的发展，国际种子检验协会(ISTA)于1950年成立TTC测定技术委员会，致力于世界TTC测定技术的发展。1953年爱尔兰都伯林ISTA世界大会第一次把TTC测定列入《国际种子检验规程》(International Rules for Seed Testing)，并且不断扩大适用种子种类和适用范围。1996年《国际种子检验规程》(International Rules for Seed Testing)已列入农业、园艺和林木的部分种子种类和应用范围内各类种子的鉴定标准(闫富英，2005)，但迄今为止工作比较集中于木本植物及麦类、豆类、玉米、棉花等大田农业种子。针对蔬菜，除番茄属作物外，其他蔬菜种子尚未列入《国际种子检验规程》(International Rules for Seed Testing)。TTC测定技术在我国农林生产上尚未普遍应用，相关研究和报道极为匮乏。我国的《农作物种子检验规程》和《国际种子检验规程》中均未对茄子种子的TTC染色进行详细描述。综合现有的各种有关资料，农作物种子生活力相关研究较多，但也只是局限于水稻(盛海平等，2000)，小麦(王辉，1999)，玉米(王丽红，2012)等粮食作物。蔬菜种子生活力测定方法的研究极少，仅在番茄(虞华丽等，2007)、苦瓜(曾正明等，2001)、冬瓜(黄亚军等，1996)等方面有报道。由于四唑染色法测定茄子种子生活力的试验前人涉及较少，目前为止茄子种子生活力的具体鉴定标准和茄子种子四唑染色图谱尚未见报道。

茄子(Solanum melongena L.)起源于东南亚的印度、缅甸及邻近的热带地区，古称酪酥、昆仑瓜等。它产量高、适应性强，结果期长，在全世界都有分布，以亚洲面积最大(杨建国等，2013)。我国是世界上最大的茄子生产国(申爱民，2007)，茄子栽培面积达73.67万hm2，占世界总面积的49.16％(徐长城等，2009)。茄子种植区域广，种子用量大，但是休眠现象比较普遍(马崇坚，2005)。

因此，目前的科研和实践中，如何研究出一种快速测定茄子种子的生活力的染色方法，确定茄子种子的最大发芽潜力，评定种子质量，为种子生产和销售提供参考根据，成为当前休眠茄子种急需解决的主要问题。

发明内容

本发明提供一种测定茄子种子生活力的四唑染色方法，将茄子种子于TTC染色液中进行染色处理。

本发明是通过以下技术方案实现的：

该染色方法将茄子种子于TTC染色液中进行染色处理；

进一步地，所述TTC染色液中，四唑的百分浓度0.1％-1.5％，优选为0.2％或1％；

进一步地，所述TTC染色液中还包括缓冲液；

所述缓冲液包括：

溶液I：浓度为5-15g/L，优选为9.078g/L的磷酸二氢钾溶液；