[发明专利]一种快速鉴定转基因抗虫棉“荃银2号”种子真实性及其纯度的SSR标记方法

说明书

技术领域

本发明涉及的是生物技术应用领域，尤其涉及的是一种快速鉴定转基因抗虫棉“荃银2号”种子真实性及其纯度的SSR标记方法。

背景技术

转基因抗虫棉的培育成功及其产业化大大促进了我国棉花产业的蓬勃与可持续发展，“荃银2号”是由安徽荃银高科种业股份有限公司精心选育的“优质、高产、抗病、抗虫”双价转基因杂交棉品种，2007年获得转基因安全证书【证书编号：农基安证字(2007)第132号】；2008年通过安徽省审定(晥棉2008002)；2011年通过国家审定(国审棉2011008)。

目前，在杂交制种基地主要以一家一户为制种单位，加之不法份子在利益的驱使下掺杂，造成棉花杂交种子纯度不合格的现象非常严重。因此，对棉花种子真实性和品种纯度的鉴定至关重要。传统的田间表型性状的鉴定容易受自然和人为因素的影响，并且费工费时，难以准确、高效的鉴别棉花种子的纯度，给棉花生产和棉农利益带来了巨大风险。而SSR分子标记技术能够从分子水平对种子样品进行检测，具有信息含量高、准确率高、稳定性好、易于分析等特点，提高了鉴定的可信度和实效性。SSR分子标记技术中一项基础性工作就是核心引物的筛选及确定，潘兆娥等(2008)利用亲缘关系较远的棉花品种对大量的SSR候选引物进行筛选，最终得到可用于DNA指纹图谱构建的核心引物319对；刘峰等(2009)从大量候选引物中共筛选26对可用于棉花品种鉴定的核心引物；这些工作为棉花分子育种提供了基础条件。但是，每个品种的棉花的核心引物不同，筛选出的核心引物的数量较多，给鉴定带来了一定的困扰。

发明内容

本发明的目的在于克服现有技术的不足，提供了一种快速鉴定转基因抗虫棉“荃银2号”种子真实性及其纯度的SSR标记方法，以提供一种快速准确、重复性好、环境条件影响小且检测结果准确稳定的“荃银2号”种子真实性及其纯度的检测方法。

本发明是通过以下技术方案实现的：

一种快速鉴定转基因抗虫棉“荃银2号”种子真实性的SSR标记方法，包括以下步骤：

(1)分别提取待检测的转基因抗虫棉“荃银2号”种子及其父母本双亲种子的基因组DNA；

(2)以步骤(1)的基因组DNA为模板，分别采用NAU2026引物对、NAU1369引物对、NAU1167引物对、NAU1102引物对、NAU1196引物对和NAU2684引物对进行PCR扩增并对扩增产物进行凝胶电泳检测，其中，所述各引物对的碱基序列分别为：

SEQ ID NO:1：NAU2026F：5’-GAATCTCGAAAACCCCATCT-3’，

SEQ ID NO:2：NAU2026R：5’-ATTTGGAAGCGAAGTACCAG-3’；

SEQ ID NO:3：NAU1369F：5’-TGGCAGAGATGAATGTAAGC-3’，

SEQ ID NO:4：NAU1369R：5’-GGTAACGGATGGAAAATCAC-3’；

SEQ ID NO:5：NAU1167F：5’-CTGACTTGGACCGAGAACTT-3’，

SEQ ID NO:6：NAU1167R：5’-AAGAGCCCTGGACAATGATA-3’；

SEQ ID NO:7：NAU1102F：5’-ATCTCTCTGTCTCCCCCTTC-3’，

SEQ ID NO:8：NAU1102R：5’-GCATATCTGGCGGGTATAAT-3’；

SEQ ID NO:9：NAU1196F：5’-ATCTGTTTCCGTACCCTCAA-3’，

SEQ ID NO:10：NAU1196R：5’-ATGGTTGCCCAAACAATACT-3’；

SEQ ID NO:11：NAU2684F：5’-CTCCTATCATTGTCCCGTCT-3’，

SEQ ID NO:12：NAU2684R：5’-CCAAGCTAGGTTTGGGTTTA-3’；

(3)分析步骤(2)的扩增产物的凝胶电泳结果，如果6对引物对中PCR扩增产物满足4对或4对以上同时具有父母本双亲的特异条带，即为转基因抗虫棉“荃银2号”。

所述步骤(1)中，提取待检测的转基因抗虫棉“荃银2号”种子基因组DNA的步骤包括：