[发明专利]一种应用切向流超滤技术制备孕马血清促性腺激素的方法

权利要求书

1.一种应用切向流超滤技术制备孕马血清促性腺激素的方法，其特征在于，包括以下步骤：

(1)将待提取的孕马原血浆放入容器内，在搅动的同时加入0.5当量的偏磷酸至pH值为3.5，滤过，取上清液；

(2)调节上清液的pH值为5.8，然后将上清液通入截留2万分子量的中空纤维柱进行切向流超滤，得到收集液，至收集液的蛋白浓度为5.0mg/ml时终止；

(3)将步骤(2)得到的收集液加入浓度为95％的冷乙醇至终浓度35％，pH值为5.3，以4000rpm进行离心，得到沉渣和上清液ⅰ，收集上清液ⅰ并暂放0～5℃的环境下；在离心后得到的沉渣中加入35％的缓冲酒精进行搅拌溶解，再以4000rpm进行离心，得到上清液ⅱ，合并上清液ⅰ和上清液ⅱ；

(4)步骤(3)合并后得到的上清液中加入浓度为95％的乙醇，二者混合后终浓度为75％，调节pH值为4.0，然后在0～5℃放置2小时以上，再以4000rpm进行离心，收集沉淀；

(5)步骤(4)收集的沉淀用灭菌生理盐水进行稀释，调节pH值为6.0～7.0，通入小型超滤器内的截留分子量1万的TFF膜包，浓缩至所需体积，即得孕马血清促性腺激素。

2.根据权利要求1所述的一种应用切向流超滤技术制备孕马血清促性腺激素的方法，其特征在于所述步骤(3)中使用的缓冲酒精中的各组分配比为：8.1g醋酸钠、1N(当量)的冰醋酸40ml、160ml的水和75ml浓度为95％的乙醇。

3.根据权利要求1所述的一种应用切向流超滤技术制备孕马血清促性腺激素的方法，其特征在于所述步骤(3)中使用的缓冲酒精的配置方法为：将8.1g的醋酸钠溶于60ml水，再加入1N(当量)的冰醋酸40ml，搅拌的同时加入100ml水和浓度为95％乙醇75ml，充分搅拌后制得。