[发明专利]一种硫酸软骨素ABC酶突变体融合蛋白及应用

权利要求书

1.一种硫酸软骨素ABC酶突变体融合蛋白，其中，所述硫酸软骨素ABC酶突变体融合蛋白包括硫酸软骨素ABC酶突变体和麦芽糖结合蛋白，其中，所述硫酸软骨素ABC酶突变体具有SEQ ID NO:1所示的氨基酸序列，所述麦芽糖结合蛋白通过肽段连接部分与所述硫酸软骨素ABC酶N端连接。

2.根据权利要求1所述的硫酸软骨素ABC酶突变体融合蛋白，其中，所述麦芽糖结合蛋白具有SEQ ID NO:2所示的氨基酸序列。

3.根据权利要求1所述的硫酸软骨素ABC酶突变体融合蛋白，其中，所述硫酸软骨素ABC酶突变体融合蛋白具有SEQ ID NO:3所示的氨基酸序列。

4.根据权利要求1所述的硫酸软骨素ABC酶突变体融合蛋白，其中，以硫酸软骨素A为底物，所述的硫酸软骨素ABC酶突变体融合蛋白的酶活和比酶活分别为24.96IU/mL enzyme和31.32IU/mg protein，以硫酸软骨素B为底物，所述的硫酸软骨素ABC酶突变体融合蛋白酶活和比酶活分别为21.58IU/mL enzyme和27.07IU/mg protein。

5.一种DNA，所述DNA序列编码权利要求1～4任一项中所述的硫酸软骨素ABC酶突变体融合蛋白。

6.一种重组载体，所述重组载体包括载体和权利要求5所述的编码硫酸软骨素ABC酶突变体融合蛋白DNA，其中所述载体包括pMAL-c2x。

7.一种转化体，所述转化体是将权利要求6所述的重组载体导入宿主细胞而得到的转化体，其中，所述宿主细胞包括E.coli BL21(DE3)。

8.一种制备权利要求1～4任一项所述硫酸软骨素ABC酶突变体融合蛋白的方法，所述制备方法包括：

(1)使用PCR通过带有突变位点的引物获得所述的的pMAL-c2x-ChSase ABC I突变体的重组载体；

(2)转化所述步骤(1)中的所述重组载体到所述宿主细胞，表达所述硫酸软骨素ABC酶突变体融合蛋白；以及

(3)破碎所述转化体，使用麦芽糖结合蛋白亲和层析分离所述表达的硫酸软骨素ABC酶突变体融合蛋白。

9.根据权利要求8所述的制备方法，其中，所述步骤(3)中麦芽糖结合蛋白亲和层析包括使用直链淀粉树脂、马铃薯淀粉柱分离。

10.一种生产低分子量硫酸软骨素的方法，所述生产方法包括：使用权利要求1～4任一项所述的硫酸软骨素ABC酶突变体融合蛋白生产低分子量硫酸软骨素。