[发明专利]一种用于预防和/或治疗HIV的CRISPR-Cas9系统及其制备方法和用途

权利要求书

1.一种用于预防和/或治疗HIV的CRISPR-Cas9系统，其包括特异性靶向HIV基因组上的特定基因位点的sgRNA，所述HIV基因组上的特定基因位点选自Gag、Env、Pol、Tat、Nef、Vif、Vpr、Vpu、5’LTR、3’LTR和Rev。

2.根据权利要求1所述的CRISPR-Cas9系统，其特征在于，所述HIV基因组上的特定基因位点包括Gag、Env、Pol、Tat、Nef、Vif、Vpr、Vpu、5’LTR、3’LTR和Rev。

3.根据权利要求1或2所述的CRISPR-Cas9系统，其特征在于，特异性靶向每个基因位点的sgRNA为1条以上，优选为4条；

进一步优选地，每条sgRNA的长度为16-22bp。

4.根据权利要求1-3任一项所述的CRISPR-Cas9系统，其特征在于，所述CRISPR-Cas9系统还包括Cas9。

5.根据权利要求1-4任一项所述的CRISPR-Cas9系统，其特征在于，所述Cas9和所述特异性靶向HIV基因组上的特定基因位点的sgRNA分别存在于质粒中。

6.如权利要求1-5任一项所述CRISPR-Cas9系统的制备方法，包括通过PCR扩增获得sgRNA片段的步骤。

7.如权利要求6所述的制备方法，其特征在于，PCR扩增所用引物选自Cas9-5'LTR-1引物对、Cas9-5'LTR-2引物对、Cas9-5'LTR-3引物对、Cas9-5'LTR-4引物对、Cas9-Pol-1引物对、Cas9-Pol-2引物对、Cas9-Pol-3引物对、Cas9-Pol-4引物对、Cas9-vif-1引物对、Cas9-vif-2引物对、Cas9-vif-3引物对、Cas9-vif-4引物对、Cas9-vpr-1引物对、Cas9-vpr-2引物对、Cas9-vpr-3引物对、Cas9-tat-1引物对、Cas9-tat-2引物对、Cas9-tat-3引物对、Cas9-tat-4引物对、Cas9-rev2-1引物对、Cas9-rev2-2引物对、Cas9-rev2-3引物对、Cas9-vpu-1引物对、Cas9-vpu-2引物对、Cas9-env-1引物对、Cas9-env-2引物对、Cas9-env-3引物对、Cas9-env-4引物对、Cas9-nef-1引物对、Cas9-nef-2引物对、Cas9-nef-3引物对、Cas9-nef-4引物对、Cas9-3'LTR-1引物对、Cas9-3'LTR-2引物对、Cas9-3'LTR-3引物对、Cas9-Gag-1引物对、Cas9-Gag-2引物对、Cas9-Gag-3引物对和Cas9-Gag-4引物对；

所述引物对碱基序列按5'-3'方向如下：

Cas9-5'LTR-1引物对：

gacaagatatccttggtttt，和CAAGGATATCTTGTCcggtg；

Cas9-5'LTR-2引物对：

cctatgagcctgcagtttt，和TGCAGGCTCATAGGcggtg；

Cas9-5'LTR-3引物对：

gctttttgcctgtagtttt，和TACAGGCAAAAAGCcggtg；

Cas9-5'LTR-4引物对：

gacccttttagtcagtggtttt，和CACTGACTAAAAGGGTCcggtg；

Cas9-Pol-1引物对：

aataccacatcccgcagtttt，和TGCGGGATGTGGTATTCcggtg；

Cas9-Pol-2引物对：

ccacagggatggaagtttt，和TTCCATCCCTGTGGcggtg；

Cas9-Pol-3引物对：

gtcagatttatgcgtttt，和GCATAAATCTGACcggtg；

Cas9-Pol-4引物对：

cctggattcctgaatgtttt，和ATTCAGGAATCCAGGcggtg；

Cas9-vif-1引物对：

tcagaagtacacatcccag，和GATGTGTACTTCTGAcggtg；

Cas9-vif-2引物对：

acatattggggtctgcatacgtttt，和CAGACCCCAATATGTcggtg；

Cas9-vif-3引物对：

gccagggagtctccatagaagtttt，和TTCTATGGAGACTCCcggtg；

Cas9-vif-4引物对：

gatctctacaatactgtttt，和AGTATTGTAGAGATCcggtg；

Cas9-vpr-1引物对：

atggctccatagcttgtttt，和AAGCTATGGAGCCATcggtg；

Cas9-vpr-2引物对：

ggagatacttggacgtttt，和GTCCAAGTATCTCCcggtg；

Cas9-vpr-3引物对：

tgccaacatagcagaatgtttt，和ATTCTGCTATGTTGGCAcggtg；

Cas9-tat-1引物对：

agccctggaagcatccgtttt，和GGATGCTTCCAGGGCTcggtg；

Cas9-tat-2引物对：

ccaggaagtcagcctgtttt，和AGGCTGACTTCCTGGcggtg；

Cas9-tat-3引物对：

atggcaggaagaaggtttt，和CTTCTTCCTGCCATAcggtg；

Cas9-tat-4引物对：

cgaaggaatcgaagagtttt，和TCTTCGATTCCTTCGcggtg；

Cas9-rev2-1引物对：

tcttagcactgttctgtttt，和AGAACAGTGCTAAGAcggtg；

Cas9-rev2-2引物对：

acttactcttgattgtagcggtttt，和ACAATCAAGAGTAAGTcggtg；

Cas9-rev2-3引物对：

ggtgggaagtcctcatgtttt，和ATATTTGAGGACTTCCCACCcggtg；

Cas9-vpu-1引物对：

caataatagcaatagttatagtttt，和TATAACTATTGCTATTATTGcggtg；

Cas9-vpu-2引物对：

ccatagtattaataaaatatgtttt，和ATATTTTATTAATACTATGGcggtg；

Cas9-env-1引物对：

catggtagaccagatgcatggtttt，和CATGCATCTGGTCTACCATGcggtg；

Cas9-env-2引物对：

tgctctttcaatatcaccacgtttt，和GTGGTGATATTGAAAGAGCAcggtg；

Cas9-env-3引物对：

gtctagcagaagaaggtttt，和CTTCTTCTGCTAGACcggtg；

Cas9-env-4引物对：

ctgctattaacaagagagtttt，和TCTCTTGTTAATAGCAGcggtg；

Cas9-nef-1引物对：

aatgggatggcctgctgtaagtttt，和TTACAGCAGGCCATCCCATTcggtg；

Cas9-nef-2引物对：

gagctgagccagcagcagatgtttt，和ATCTGCTGCTGGCTCAGCTCcggtg；

Cas9-nef-3引物对：

gggagcagcatctagagaccgtttt，和GGTCTCTAGATGCTGCTCCCcggtg；

Cas9-nef-4引物对：

tgcctggctagaagcacaaggtttt，和CTTGTGCTTCTAGCCAGGCAcggtg；

Cas9-3'LTR-1引物对：

gatttccactgacctttggagtttt，和TCCAAAGGTCAGTGGAAATCcggtg；

Cas9-3'LTR-2引物对：

cggagaaagaagtgttagtggtttt，和CACTAACACTTCTTTCTCCGcggtg；

Cas9-3'LTR-3引物对：

ctttccgctggggactttccgtttt，和GGAAAGTCCCCAGCGGAAAGcggtg；

Cas9-Gag-1引物对：

gtcagtattaagtgcgtttt，和GCACTTAATACTGACcggtg；

Cas9-Gag-2引物对：

cacaggaaaaggcagccgtttt，和GGCTGCCTTTTCCTGTGcggtg；

Cas9-Gag-3引物对：

gaacgatttgcagtcaagtttt，和TTGACTGCAAATCGTTCcggtg；

Cas9-Gag-4引物对：

ggaagctttagagaagtttt，和TTCTCTAAAGCTTCCcggtg。