[发明专利]芦苇内生真菌及其提取物的制备方法和用途

说明书

技术领域

本发明属于微生物技术领域，主要涉及一种从银川野生芦苇根系中分离得到的一株内生真菌No51及其醇提取物的制备方法和用途，主要涉及其醇提取物的制备方法及其对水稻稻瘟病的诱导抗病作用。

背景技术

作为水稻主要病害之一的稻瘟病，流行年份造成水稻严重减产。目前稻瘟病的防治措施主要包括抗病品种选育、药剂防治和栽培管理。当病害突发或己经形成时，速效的化学防治仍然是最为有效的防治手段。但农药对环境污染大、费用高，长期使用会导致稻瘟病菌产生抗药性。因此，寻求新的、有效的防治稻瘟病的方法或途径有着非同寻常的意义。近年来，随着植物诱导抗病性的迅速发展，用其防治稻瘟病取得了显著的效果，对稻瘟病诱导剂的研究也随之增多和深入。诱抗剂通过激活水稻潜在的防御机制，诱导潜在抗性基因的表达，以此来达到防御稻瘟病的目的。诱抗剂将成为防治稻瘟病的一种重要形式。

发明内容

本发明针对上述现有技术中存在的问题，以水稻稻瘟病病菌为靶标，从银川野生芦苇根系中分离得到的一株内生真菌No51，其醇提取物对稻瘟病具有诱导抗病效果。并对内生真菌No51进行了种属鉴定和醇提取物诱导抗病效果的系统研究，旨在为新型微生物源农药的研制和开发提供优良的出发菌株。

本发明是通过以下技术方案实现的：

从银川野生芦苇根系中分离纯化得到内生真菌No51，该内生真菌分类名称为：镰孢菌属(Fusariumsp.)，其保藏编号为CGMCCNO.10118，保藏日期为2014.12.11，保藏单位名称：中国微生物菌种保藏管理委员会普通微生物中心；保藏单位地址：北京市朝阳区北辰西路1号院3号。

利用CTAB法提取内生真菌基因组DNA，利用通用引物ITS4与ITS5进行基因的PCR扩增和测序；所述的内生真菌引物ITS4与ITS5扩增DNA序列如下：

CCCTCGGGCATTCCGACCTGATTCGAGGTCACTTCAGAAGAGTTGGGTGTTTTACGGCGTGGCCGCGCCGCTCTCCAGTCGCGAGGTGTTAGCTACTACGCGATGGAAGCTGCGGCGGGACCGCCACTGTATTTGGGGGACGGCGTGTGCCCACGGGGGGCTCCGCCGATCCCCAACGCCAGGCCCGGGGGCCTGAGGGTTGTAATGACGCTCGAACAGGCATGCCCGCCAGAATACTGGCGGGCGCAATGTGCGTTCAAAGATTCGATGATTCACTGAATTCTGCAATTCACATTACTTATCGCATTTCGCTGCGTTCTTCATCGATGCCAGAGCCAAGAGATCCGTTGTTGAAAGTTTTAATTTATTTGCTTGTTTTACTCAGAAGAAACATTATAGAAACAGAGTTAGGGGTCCTCTGGCGGGGGCGGCCCGTTTCACGGGGCCGTCTGTTCCCGCCGAAGCAACGTTTAGGTATGTTCACAGGGTTGATGAGTTGAATAACTCGGTAATGATCCCTCCGCTGGTTCACCAACGGAGACCTTGTTACGATTTTTACTTACA。

所述的芦苇内生真菌提取物的制备方法包括如下步骤：从银川野生芦苇根系中分离纯化得到内生真菌No51，将该内生真菌在固体PDA培养基上培养后，转入液体PDA培养基中；培养6d取出，抽提菌丝体后加入与菌丝体等倍体积的20wt％乙醇，浸提24h，过滤，滤液保存，即得到内生真菌代谢产物制备液。

所述的液体PDA培养基培养为，将活化的内生真菌菌种接种于装有10mLPDA培养基的小三角瓶中，置于28℃、200r·min^-1的摇床培养。

所述内生真菌的醇提取物具有非常高的活性，微量使用后，对水稻的稻瘟病具有较强的诱导抗病效果。

本发明具有的优点和积极效果是：

1.内生真菌No51的醇提取物作为新型的水稻抗病诱导剂具有高效、无毒、广谱的特点，可以最大程度地降低农药的使用，减轻农药的环境污染。

2.内生真菌No51的醇提取物作为新型水稻抗病诱导剂是一种具有超高活性的植物内生菌的发酵产物，使用微量即能达到诱导抗病效果。

具体实施方式