[发明专利]SAK蛋白在制备降血脂药物中的应用

说明书

技术领域

本发明属于生物医药技术领域，具体涉及SAK蛋白在制备降血脂药物中的应用。

背景技术

葡激酶(staphylokinase SAK)是由金黄色葡萄球菌分泌的一种含有136个氨基酸残基的胞外蛋白质。葡激酶在本世纪四十年代末被发现，并在五十年代至六十年代发现其具有纤溶作用。

中国专利文献(CN101314769A)中公开了一种葡激酶(其氨基酸序列在文献中的序列表为SEQ ID NO：1)及其基因(其核酸序列在文献中的序列表为SEQ ID NO：2)。上述公开的葡激酶为重组蛋白，具有较高的溶栓活性。

目前降脂类药物主要包括HMG-CoA还原酶抑制剂，胆酸螯合剂，纤维酸类，烟酸及其衍生物，中药成分如枸杞多糖、茶叶多糖、黄连素等。

发明内容

本发明的目的在于提供SAK蛋白在制备降血脂药物中的应用。

上述SAK蛋白，其氨基酸序列为中国专利文献(CN101314769A)中序列表中的SEQ ID NO：1所示。

本发明的目的还在于提供一种降血脂组合物，包含上述SAK蛋白。

所述SAK蛋白的制备方法为：培养含有SAK基因序列重组表达载体的工程菌，通过破碎菌体分离上清经过纯化后获得SAK蛋白液，将纯化的SAK蛋白中加入赋形剂，4℃保存；再加入冻干保护剂，冷冻干燥。

检测冻干样品的活性和成型的变化，经过37℃加速实验后，检测其活性和成型状况的改变，确定SAK蛋白粉剂制备的主要成分。

所述赋形剂为海藻糖。

所述保护剂为甘露醇、右旋糖酐、蔗糖、乳糖、氯化钠、甘氨酸中的一种以上。

上述降血脂药物，可通过静脉、皮下或口服给药。

将上述降血脂组合物使用缓冲液复溶后，使用生理盐水稀释至0.01～0.5mg/ml静脉注射，每天注射一次，连续注射，注射周期为14天，所述SAK蛋白用量为0.01mg/kg～5mg/kg。

本发明的有益效果：通过本发明人的研究显示SAK蛋白可能通过stat3信号通路调控脂肪代谢相关基因表达。本发明中的SAK蛋白对高脂血症动物模型给药在14天内即可显示出显著的降脂效果，可以显著降低血浆总胆固醇(TG)，甘油三酯(TC)，低密度脂蛋白(LDL-c)水平，延长给药周期后降脂效果更好，这种作用显著优于目前常用的他汀类降脂药物。本发明的SAK蛋白经过筛选获得的冻干粉制剂，在2-8℃存放36个月，成品的外观、pH值、溶解度及溶栓活性没有明显的改变。

附图说明

图1为添加不同成分的SAK蛋白粉剂外观。

图2为SAK蛋白粉剂溶栓活性检测结果。

图3为高脂喂养鹌鹑血脂检测结果，*：与对照组相比P<0.05；**：与模型组相比P<0.05。

具体实施方式

以下实施例并不限定本发明，实施例中未详细说明的操作步骤请参照《分子克隆实验指南》第三版^[2]相应部分(J.萨姆布鲁克E.F.弗里奇等，科学出版社(J.Sambrook，David W.Russell，Molecular Cloning:A Laboratory Manual,3rd ed.,2001(1).))或参阅所用试剂盒的说明书。

实施例1 SAK蛋白冻干粉的制备

溶液配制及配方组成:配制1％～5％的海藻糖溶液，20％～50％蔗糖溶液、0.5～1mol/L甘氨酸溶液、1％～50％右旋糖酐溶液、0.5mol/lNaCl溶液，将以上成分组成不同的冻干保护剂配方，如下表所示。分装于西林瓶中。

冷冻干燥：分装结束后，将样品置于冷井中密封，预冻至冷井温度-70℃，物料-63℃，开始启动干燥程序24h后取出样品，加盖密封。在40W的日光灯下，观察成型状况，然后加入1ml生理盐水，在40W日光灯下观察样品溶解状况及有无不溶物等。将复溶后的蛋白干粉用生理盐水倍比稀释至所需浓度检测蛋白的活性。

实施例2 溶栓活性检测方法

称取125mg琼脂糖(Biorad电泳级)，加入23m1生理盐水,煮沸溶解,60℃水浴平衡,加凝血酶14μ1(100IU/ml),纤溶酶原280μl(0.5mg/ml),要边加边摇匀,加2.2m1人纤维蛋白原(6mg/ml),不停地摇匀,混浊后马上倒平板(直径8cm),4℃冰箱水平放置至少半小时(应在两天之内使),充分凝固后待用。

标准品和待测样品的稀释