[发明专利]一种用于保护游离DNA的血液抗凝剂及其应用

说明书

技术领域

本发明涉及一种保护血液样品的抗凝剂，具体是一种用于保护游离DNA的血液抗凝剂。

背景技术

不同用途的采血管中含有不同的添加剂或附加物。主要包括抗凝剂和促凝剂等，添加剂可以是液体状态、溶液干燥物、冷冻干燥物、粉状等。

在临床中，由于肝素会抑制PCR过程，所以一般使用EDTA(包括乙二胺四乙酸二钾、乙二胺四乙酸三钾、乙二胺四乙酸二钠)、枸橼酸钠进行血液的抗凝，抗凝血经过离心后，获得的血浆再进行后续研究。

抗凝后的血液通过离心，可获得血浆。血浆DNA已经成为临床上重要的样本。主要用于两方面的研究，一是产前诊断，二是肿瘤相关标志物、特异性靶标的检测。

在产前诊断中通过对男胎孕妇血细胞、血浆和血清中Y-chromosomal的检测，80％的孕妇的血浆和血清中能检测到胎儿源性的DNAi，且血浆DNA的灵敏度和准确性更高。而在未怀孕的女性中，均不能检测出Y-chromosomal基因，三者的特异性一致。

北京肿瘤医院王洁教授2009年的一项研究ⁱⁱⁱⁱⁱiv分析血浆DNA样本EGFR 19外显子和21外显子的突变状态，比较了血浆样本和肿瘤组织的突变状态，并确定了EGFR突变情况和病人临床预期结果的关联性。肿瘤患者的血浆样本与肿瘤组织的突变状态的一致性为87％，明确了如果无法获得患者的肿瘤组织的情况下，血浆样本可用于临床肿瘤突变状态分析。

虽然血浆DNA可用于临床的预后及检测等方面，但是在临床过程中，由于实验条件的限制或实验时间的限制，无法在得到血液后第一时间分离血浆，血液中的细胞破裂、血浆中的DNA降解，造成无法进行后续实验或实验结果的假阴性，从而无法为临床提供有价值的信息。

有鉴于此，确有必要提供一种可有效防止细胞破裂，血浆游离DNA降解，为血浆提供稳定的环境，延长血液的保质期的血液抗凝剂，以减少对后续检验检测的干扰检测。

发明内容

本发明的目的在于提供一种可有效防止细胞破裂，血浆游离DNA降解，为血浆提供稳定的环境，延长血液的保质期，避免游离DNA降解的血液抗凝剂。

为实现上述目的，本发明采用如下技术方案：

一种用于保护游离DNA的血液抗凝剂，按重量体积比(w/v)计，包括以下组分：

作为本发明抗凝剂的一种改进，所述甲醛释放剂为1,3-二羟甲基-5,5-二甲基海因，羟甲基甘氨酸钠，尼泊金甲酯钠，尼泊金乙酯钠、尼泊金丙酯钠中的一种或几种。甲醛释放剂的添加，可有效抑制白细胞破裂。优选地，所述甲醛释放剂为1,3-二羟甲基-5,5-二甲基海因。

作为本发明抗凝剂的一种改进，所述抗凝剂为乙二胺四乙酸二钾、乙二胺四乙酸三钾、乙二胺四乙酸二钠、枸橼酸钠中的一种或几种。抗凝剂的添加，可防止凝血、抑制DNA酶。优选地，所述抗凝剂为乙二胺四乙酸二钾。

作为本发明抗凝剂的一种改进，所述嘌呤为腺嘌呤、鸟嘌呤中的至少一种。嘌呤的添加，可维持红细胞的形态，不易于变形。优选地，所述嘌呤为鸟嘌呤。

作为本发明抗凝剂的一种改进，所述磷酸二氢盐为磷酸二氢钠，PH 7.0，提供PH缓冲环境。

作为本发明抗凝剂的一种改进，所述氯化盐为氯化钠、氯化钾、氯化铵的至少一种，氯化盐的添加有利于保持血浆环境的稳定性。优选地，所述氯化盐为氯化钠。

作为本发明抗凝剂的一种改进，所述核酸酶抑制剂为尿素、DEPC、SDS、异硫氰酸胍的0种或一种或几种，核酸酶抑制剂的添加，可抑制RNA酶，避免血浆中核酸的降解。优选地，所述核酸酶抑制剂为尿素。

本发明可有效防止细胞破裂，为血浆提供稳定的环境，延长血液的保质期，以防止由于血液变质，游离DNA降解而影响后续的检测。本发明用于提取游离DNA，以获得疾病信息。

本发明抗凝剂的贮存温度为4-25℃，易于血液样本的保存。

附图说明

图1为本发明与普通EDTA采血管对比试验1Ct值对照图。

图2为本发明与普通EDTA采血管对比试验2Ct值对照图。

图3为含有肿瘤细胞血液样本中使用本发明与普通EDTA采血管对比试验Ct值对照图

具体实施方式

下面结合实施例对本发明及其有益效果作进一步详细的描述，但本发明的实施方式并不限于此。

实施例1

本实施例提供的血液抗凝剂，按重量体积比(w/v)计，其中体积为血液的体积。包括以下组分：