[发明专利]一种杂交瘤细胞株、及其分泌单克隆抗体和应用

说明书

本发明公开了一种杂交瘤细胞株及其所产生的抗猪流行性腹泻病毒单克隆抗体。本发明提供的抗猪流行性腹泻病毒单克隆抗体，对猪流行性腹泻病毒具有预防和/或治疗作用，解决了现有疫苗、母源抗体不足时所引发的仔猪流行性腹泻病毒感染，并且弥补现有疫苗单一的预防作用；还可用于开发猪流行性腹泻病毒的诊断试剂产品。

技术领域

本发明涉及一种杂交瘤细胞株、其所分泌的单克隆抗体、使用分泌的单克隆抗体制备的药物组合物、试剂盒及应用，属于生物医药领域。

背景技术

猪流行性腹泻(porcine epidemic diarrhea,PED)是由猪流行性腹泻病毒(porcine epidemic diarrhea virus,PEDV)引起的急性、接触性、高度传染性消化道疾病，主要症状为呕吐、水样腹泻和脱水，感染7日龄以内仔猪死亡率高达80％-100％。对我国养猪业造成巨大的损失。自2010年以来，我国秋冬季节大面积爆发腹泻疾病，与此同时，韩国、日本、台湾、美国等地也大范围爆发此病。分子生物学研究表明，猪流行性腹泻病毒发生了变异，已有的疫苗株对流行毒株的感染起不到很好的保护作用。

目前，国内外已有的商品化疫苗均为经典的疫苗株，对控制本病虽有一定的效果，但仍不能提供给仔猪很好的被动保护。同时，仔猪获得母源抗体的水平不均一，易引起部分仔猪再次发病并使病原迅速传播。虽已有用于预防或治疗猪流行性腹泻病毒的卵黄抗体，但卵黄抗体是高蛋白质，不仅成本较高，在生产过程中还易发生细菌感染而不易规模化生产(张家峥，施萍，牛桂玲.使用高免卵黄抗体液利弊及前景.中国家禽，2003,25(23):45)。基于此，亟需一种新的途径解决现有疫苗、母源抗体不足时所引发的猪流行性腹泻病毒感染，以及现有疫苗单一的预防作用。

发明内容

为了解决现有技术的不足，本发明提供了一种杂交瘤细胞株、其所产生的抗猪流行性腹泻病毒单克隆抗体及应用，该单克隆抗体可以预防和/或治疗猪流行性腹泻病毒所引发的感染，还可用于检测猪流行性腹泻病毒。

本发明的第一方面在于提供小鼠骨髓杂交瘤细胞8A3A10株，所述杂交瘤细胞8A3A10株保藏号为CCTCC No.C2014197，保藏于中国典型培养物保藏中心，保藏地址为中国武汉·武汉大学，保藏时间为2014年11月3日。

本发明的小鼠骨髓杂交瘤细胞8A3A10株由猪流行性腹泻病毒HN1301株抗原免疫小鼠后，取其脾细胞，与SP2/0骨髓瘤细胞融合，经筛选制得。其所产生的单克隆抗体的中和抗体效价大于1:512，具有良好的中和活性；单克隆抗体的相对亲和力常数为1:5120，与抗原的抗原决定簇的结合强度非常高。

本发明的第二方面在于提供一种单克隆抗体，所述单克隆抗体由所述杂交瘤细胞8A3A10株分泌产生。

所述单克隆抗体能有效抵抗猪流行性腹泻病毒，所述单克隆抗体是由所述杂交瘤细胞8A3A10株分泌产生。所述单克隆抗体的中和抗体效价大于1:512，也就是说，所述单克隆抗体具有良好的中和活性，可抑制猪流行性腹泻病毒重复感染靶细胞；所述单克隆抗体的相对亲和力常数为1:5120，也就是说，其与抗原的抗原决定簇的结合强度非常高，优于现有技术中的抗猪流行性腹泻病毒单克隆抗体的结合强度。

术语“单克隆抗体”是指获自基本上同源的抗体群的抗体，即组成该群体的抗体个体都相同，除了可能存在少量可能的自发突变。因此，修饰语“单克隆”是指该抗体的性质不是离散抗体的混合物。优选地，所述单克隆抗体包括单价的或是单链抗体、双链抗体、嵌合抗体、人源化抗体以及上述抗体的衍生物、功能等同物和同源物，也包括抗体片段和含有抗原结合结构域的任何多肽。