[发明专利]一种筛选蒲公英耐盐突变体的方法

权利要求书

1.一种筛选蒲公英耐盐突变体的方法，其特征在于：包括以下步骤：

1)无菌苗培养

挑选饱满种子用75％的乙醇处理30～50s，再用无菌水冲洗3～4次，用0.1％升汞浸泡10～15min，然后用无菌水冲洗3～4次，接种到含有7g/L琼脂粉、10g/L蔗糖、pH值5.7～6.0的MS培养基中，在室温为21～23℃，暗培养30d后获得无菌苗；

2)愈伤组织诱导

取无菌苗的叶片，切成0.5×0.5cm大小的方块，接种到诱导培养基中，35～40d获得胚性愈伤组织；

3)EMS诱变处理和NaCl胁迫筛选

将胚性愈伤组织接种在含有0.4％浓度EMS的液体分化培养基中，进行震荡培养2h，用无菌水冲洗干净，转至含有300mmol/L NaCl的固体分化培养基中，培养28d后，转至不含NaCl的相同培养基中21d，交替进行，重复2次，选择高3～4cm的小苗，转移到含有300mmol/LNaCl的MS培养基中，再次进行耐盐筛选，21d后将生长正常的小苗接种到生根培养基中，7～10天完成生根，获得耐盐试管苗；

4)耐盐植株获得

将耐盐试管苗先进行闭瓶炼苗7-15d，而后开瓶炼苗5-10d，移栽至基质为1:1的蛭石和河沙混合物中，使其成活，20-30d后，再移栽到温室大棚的土壤中；

5)耐盐植株的鉴定

利用土壤全盐含量0.6％左右的盐碱原土盆栽法对获得的耐盐植株进行耐盐性鉴定，以未经诱变和NaCl筛选的再生植株作对照，筛选出成活好，长势优，各项生长指标明显优于对照的耐盐植株。

2.根据权利要求1所述的一种筛选蒲公英耐盐突变体的方法，其特征在于：

所述的诱导培养基为含0.5mg/L 6～苄氨基嘌呤、0.2mg/L二氯本氧乙酸、7g/L琼脂粉和30g/L蔗糖、pH值5.7～6.0的MS培养基；

所述的液体分化培养基为含1mg/L激动素、0.3mg/L萘乙酸、30g/L蔗糖、pH值5.7～6.0的MS培养基；

所述的固体分化培养基为含1mg/L激动素、0.3mg/L萘乙酸、7g/L琼脂粉、30g/L蔗糖、pH值5.7～6.0的MS培养基；

所述的生根培养基为含有0.5mg/L萘乙酸、7g/L琼脂粉、30g/L蔗糖、pH值5.7～6.0的MS培养基。

3.根据权利要求1所述的一种筛选蒲公英耐盐突变体的方法，其特征在于：步骤(2)培养条件和步骤(3)分化培养条件为：温度为21～23℃，每天光照时间为12～16小时，光照设备为白炽灯管，光照强度为2000lux。

4.根据权利要求1所述的一种筛选蒲公英耐盐突变体的方法，其特征在于：步骤(3)中所述的震荡培养的条件为23℃恒温下，转速70r/min,光照强度2000lux。

5.根据权利要求1所述的一种筛选蒲公英耐盐突变体的方法，其特征在于：步骤(4)所述的炼苗条件为：自然光照、温度21-23℃、空气湿度为80～85％。