[发明专利]猪RBP4蛋白体外表达及其抗体制备

说明书

技术领域

本发明涉及生物技术领域，具体涉及猪RBP4蛋白的体外表达及其抗体的制备。

背景技术

视黄醇结合蛋白(Retinol-Binding Proteins，RBPs)是体内一种低分子量的载脂蛋白，有四种结构形式，分别为RBP-1、RBP-2、RBP-3和RBP4。其中RBP4是一种主要在肝脏表达的转运蛋白，主要作用是结合和转运VitaminA(VA)。随着对其功能的深入研究，发现许多肝脏外组织也能合成RBP4，如大鼠的卵黄囊，猪、绵羊和奶牛的孕体、子宫、胎盘组织，并且Harney等研究表明，子宫中RBP4的表达水平可能受激素的调节。目前研究表明，RBP4在家畜生产性能，尤其在猪繁殖性能方面具有重要意义，已经成为母猪高产仔数的理想候选基因。研究报道，RBP4基因存在两种基因型，基因型之间的差异为0.5头/窝(总产仔数)和0.26头/窝(产活仔数)。我国学者在一些地方猪种中也发现了显著影响猪总产仔数和产活仔数的RBP4基因型。RBP4基因除了与繁殖性状相关以外，也能直接影响动物的胚胎发育。用siRNA干扰技术抑制小鼠RBP4合成后，导致胚胎卵黄血管、脑神经血管和眼部畸形，然而，添加外源RBP4后胚胎发育恢复正常，说明，RBP4在胚胎发育过程中具有重要的调节作用。因此，猪RBP4蛋白体外表达及制备特异性结合猪RBP4蛋白的抗体具有重要的意义。

发明内容

有鉴于此，本发明的目的在于提供猪RBP4蛋白体外表达及其抗体制备。

为实现本发明的目的，本发明采用如下技术方案：

一种猪RBP4蛋白体外表达的方法，获得猪RBP4目的基因，将猪RBP4目的基因与表达载体重组后转化表达宿主菌，诱导猪RBP4蛋白的表达。

在一些实施方案中，所述猪RBP4目的基因的核苷酸序列如SEQ ID NO.1所示。

在一些实施方案中，所述表达载体为pEASY-E1。

在一些实施方案中，所述表达宿主菌为BL21(DE3)pLySs。

在一些实施方案中，所述诱导为宿主菌培养后加入IPTG至终浓度为1mmol/L。

本发明还提供了一种制备猪RBP4蛋白的抗体的方法，以猪RBP4蛋白为抗原免疫家兔获得猪RBP4蛋白多克隆抗体血清。

在一些实施方案中，所述猪体RBP4蛋白为猪RBP4目的基因体外表达后经纯化、复性得到。

在一些实施方案中，所述体外表达为原核表达。

在一些实施方案中，所述纯化为镍柱亲和层析纯化。

在一些实施方案中，所述复性为尿素溶液透析复性。

本发明还提供了所述制备方法制备的猪RBP4蛋白抗体。

本发明通过Western Blot实验验证所述抗体的特异性，结果显示本发明所述猪RBP4蛋白抗体特异性好，能够特异性猪肝脏组织蛋白和纯化的猪RBP4蛋白。

本发明还提供了上述猪RBP4蛋白抗体在制备用于检测猪RBP4蛋白的免疫检测工具中的应用。

具体地，所述免疫检测工具为试剂盒、芯片或试纸。

在具体的实施例中，本发明提供了一种免疫组化检测试剂盒，包括上述猪RBP4蛋白抗体，可检测组织细胞中RBP4的表达状况。

与现有技术相比，本发明提供了一种猪RBP4蛋白体外表达的方法以及以表达的蛋白制备猪RBP4蛋白抗体的方法。本发明所述猪RBP4蛋白抗体可与猪肝脏组织蛋白和纯化的猪RBP4蛋白特异性结合，特异性好，广泛适用于各种检测猪RBP4蛋白的免疫检测工具。

附图说明

为了更清楚地说明本发明实施例或现有技术中的技术方案，下面将对实施例或现有技术描述中所需要使用的附图作简单地介绍。

图1示实施例1RBP4基因PCR电泳结果，其中泳道M为2000bp marker，泳道1为RBP4基因PCR电泳结果；

图2示实施例110％SDS-PAGE电泳分析结果图，其中泳道M为蛋白marker、泳道1为BL21(DE3)pLysS空菌体、泳道2为常规LB培养的含表达载体的BL21(DE3)pLysS菌体未诱导组、泳道3为添加1％葡萄糖LB培养的含表达载体的BL21(DE3)pLysS未诱导组、泳道4-5为含pEASY-E1-RBP4的BL21(DE3)pLysS诱导后上清、泳道6-7为含pEASY-E1-RBP4的BL21(DE3)pLysS诱导后沉淀；