[发明专利]不解糖假苍白杆菌WZZ003及其应用

说明书

(一)技术领域

本发明涉及一种新菌株--不解糖假苍白杆菌WZZ003及其在立体拆分(R,S)-2-(2,6-二甲基苯基氨基)丙酸甲酯反应生成光学纯(R)-2-(2,6-二甲基苯基氨基)丙酸中的应用，转化产物(S)-2-(2,6-二甲基苯基氨基)丙酸甲酯通过化学消旋法重新生成R,S-2-(2,6-二甲基苯基氨基)丙酸甲酯作为反应底物回收利用。

(二)背景技术

酰胺类农药如甲霜灵是一种高效、低毒、广谱的内吸性杀菌剂，对由霜霉病菌、疫霉病菌、腐霉病菌等引起的植物病害具有较强的治疗效果，并且有较长的药效，是当今广泛使用的杀菌剂品种之一。甲霜灵(Metalaxyl)是由一对光学异构体组成的外消旋化合物，其中R-异构体(精甲霜灵)的杀菌活性比S-异构体高20-30倍，某些方面甚至高100倍以上，而且S-异构体对R-异构体的活性还有一定的抑制作用。在获得同等效果的情况下，精甲霜灵的用量仅为甲霜灵的一半或几分之一。另外，R-异构体在环境中的降解速度要比外消旋化合物快得多，具有更好的环境相容性。因此，精甲霜灵的工业化生产具有良好的经济效益和社会效益。

(R)-DMPM是合成酰胺类农药的关键中间体，可用于生产N-酰基丙酸类杀菌剂。目前，文献报道的合成(R)-DMPM主要是用具有旋光性的起始原料，控制适当的反应条件获得。

根据反应原料(L)-X-CH(CH₃)COOCH₃的不同，分为以下几种不同的制备方法。

(1)右旋的α-(三氟甲基磺酸酯基)丙酸甲酯和与之对应的胺类反应生成(R)-DMPM。反应式如下：

(2)以右旋的α-氯代丙酸甲酯为起始原料，与2,6-二甲苯胺，在甲苯溶液中反应72个小时控制反应温度在115℃，可以得到79％的(R)-(-)-DMPM，反应式如下：

(3)以甲苯作溶剂，(L)-α-磺酸酯基丙酸甲酯与2,6-二甲苯胺反应54个小时控制温度，在(90-130)℃之间，可得93％的R-DMPM。

浙江禾本农药化学有限公司利用L-乳酸为原料制备精甲霜灵，R体含量低，对映体过量值大多为92％，总收率为58％。综合以上几个化学合成方法可以看到化学拆分工艺途径存在着收率低、成本高、步骤繁多、产物纯度较低、污染严重等问题，因此采用微生物酶法拆分(R,S)-DMPM制备(R)-DMPM，具有选择性好，收率高，成本低的优势。

目前酶法拆分(R,S)-DMPM方法主要是用商品脂肪酶来制备，吉林大学的王岩等用PSL脂肪酶来拆分DMPM，底物浓度为5mmol，产物e.e.p％＝99％，总产率92.8％，化学纯度98％。但是由于底物浓度低，商品脂肪酶价格昂贵，成本很高，效率很低，不宜用于工业生产。本发明的微生物酶法拆分工艺底物浓度大大提高，最高可达100g/L(500mmol)以上，自制的微生物脂肪酶成本低，R体含量高，对映体过量值≧99.5％，收率为95％以上，另外通过对未反应的另一个产物(S)-DMPM重新消旋回用，可达到100％全利用效果，完全达到工业化生产的要求。

(三)发明内容

本发明目的是为了解决上述方法的不足，通过筛选产脂肪酶微生物，提供了一种廉价高效的产酶微生物，以外消旋(R,S)-DMPM(Ⅰ)为反应底物，立体选择性水解右旋甲霜灵中间体制备(R)-MPA-acid(Ⅲ)。

本发明采用的技术方案是：

本发明提供一株新菌株--不解糖假苍白杆菌(Pseudochrobactrum asaccharolyticum)WZZ003，保藏于中国典型培养物保藏中心，保藏编号CCTCC NO：M 2014209，保藏日期2014年5月18日，地址为中国，武汉，武汉大学，邮编430072。