[发明专利]一种脐血干细胞的体积离心分离方法

权利要求书

1.一种脐血干细胞的体积离心分离方法，其特征在于，包括如下步骤：

1)羟乙基淀粉沉淀红细胞；

2)以内置有Pt丝滤网的离心机进行体积离心分离单个核细胞。

2.根据权利要求1所述的脐血干细胞的体积离心分离方法，其特征在于，所述步骤1)为：取枸橼酸钠抗凝脐血80～100ml，无菌操作加入500ml圆形沉降瓶中，加脐带血量1～3倍体积的PBS，充分混匀，加脐带血量，1.5倍体积的医用6％中分子羟乙基淀粉130/0.4氯化钠注射液，充分混匀，盖盖，18℃，静置60min。

3.根据权利要求1所述的脐血干细胞的体积离心分离方法，其特征在于，所述步骤1)为：将6％的羟乙基淀粉分别按照脐血血量的1/5加入到采集来的血袋中；混合均匀后使用无菌封口胶密封穿刺点，倒置与12℃的低温环境中静置5～8小时；分离好后先将脐血下层的红细胞缓慢的放出，取50ml离心管置于其中，然后将血浆放入另一只50ml离心管中；把盛有红细胞的离心管，室温、600r/min离心5～8分钟，把上层的血浆部分吸出后置于另一只盛有血浆的50ml离心管中，将剩下的红细胞丢弃即可；把收集血浆的离心管，室温、600r/min离心5～8分钟，取上清部分保留在50ml离心管中，将下层红细胞去除；将上步中收集的上清液室温、1200r/min离心10～20分钟，将含有核细胞下层部分浓缩至约5ml，用PBS将体积调整至25ml。

4.根据权利要求1或2或3所述的脐血干细胞的体积离心分离方法，其特征在于，所述步骤2)为吸取羟乙基淀粉沉淀红细胞后的上清液，缓慢加至分离液液面上，置水平离心机上，4℃，离心力700g，离心30min，离心后用移液管伸到单个核细胞层，轻轻吸出，加入到PBS液中，4℃，洗涤细胞3遍，即得浓缩。

5.根据权利要求4所述的脐血干细胞的体积离心分离方法，其特征在于：在所述水平离心机的内表面设置有一层Pt丝滤网，所述Pt丝滤网的孔径为15～25μm。

6.根据权利要求5所述的脐血干细胞的体积离心分离方法，其特征在于：在以所述水平离心机进行体积离心时，对Pt丝滤网还周期性的通微弱的电流，通电方式为每5秒为一个周期，周期内持续通电，电压为3～5μV，相邻的两个周期间隔10秒。