[发明专利]快速获得大量小麦双单倍体纯合群体的方法

权利要求书

1.一种快速获得大量小麦双单倍体纯合群体的方法，其特征在于，包括以下步骤：

（1）种植：将小麦杂交种子分三期进行秋播，将甜玉米种子分六期播种于温室中，使小麦与甜玉米的花期相遇；

在黄淮地区，小麦杂交种子的播期分别为10月10～13日、10月25～28日、11月10～13日，甜玉米种子的播期分别为12月25～28日、次年1月5～8日、1月15～18日、1月25～28日、2月5～8日、2月15～18日；

（2）单倍体诱导：在小麦抽穗后2～3d进行人工去雄，套袋隔离，去雄后3d用玉米花粉对小麦逐花授粉，授粉后仍套袋隔离，间隔24h后再授粉一次；在授粉6h后对小麦穗喷施100mg/L 2,4-二氯苯氧乙酸溶液，间隔24h后再喷施一次2,4-二氯苯氧乙酸溶液，然后将杂交穗的地上部分取下浸入含50g/L蔗糖、8mg/L H₂SO₃和100mg/L 2,4-二氯苯氧乙酸的混合营养液中，于25℃离体培养杂交穗，并每隔3～4d更换一次混合营养液；

（3）单倍体幼胚的剥离和离体培养成单倍体苗：经9～16d培养后，剥出小麦单倍体幼胚，接种于1/2MS培养基上，并置于25℃条件下暗培养10～20d，幼胚萌动后，转入25℃光培养至出单倍体苗；

（4）移栽和春化：待单倍体苗长到4～6cm高、2～3叶龄时分批进行移栽，再在3～6℃条件下春化处理30～35d；

（5）加倍和移栽：春化结束将单倍体苗再分批移入13～15℃条件下缓苗5～7d后，进行秋水仙素加倍，然后移栽到花盆中，覆膜保湿，13～15℃补光条件下缓苗生长，促进分蘖；10～15d后揭去薄膜，将苗体移入网室，在30%遮光率下生长2周后移出，自然生长；

所述加倍的方法为：为防止根系受损，在加倍前一天浇透水；将春化后的麦苗从育苗钵中取出，用水将根部冲洗干净，剪根处理使根长保留到3～4cm，浸入含秋水仙素600 mg/L、二甲基亚砜20g/L和吐温-20 0.5g/L的染色体加倍溶液中，使分蘖节处于溶液液面下2～3cm，在23～25℃避光条件下处理3～4h进行染色体加倍，将处理后的麦苗小水细流冲洗过夜即可，加倍、冲洗时需补充氧气，氧气量以充气时气泡连续冒出，但不造成液体溅出为准；

所述缓苗的条件为光照3000Lx 16h/d，温度13～15℃，覆膜保湿；

（6）收获双单倍体种子：待进入抽穗期，将加倍后的单倍体苗移入温室，增温补光；抽穗时，对所有加倍植株的穗子及时套袋隔离，防止异交；待种子陆续成熟后，按株编号分批收获，获得双单倍体种子；

（7）冬播：将收获的双单倍体种子晾干，按顺序编号进行田间种植，播后覆膜，待出苗2叶后去膜；

（8）夏收：待小麦进入腊熟末期后，同普通小麦一样收获，按株行混收，即得扩繁后的小麦双单倍体纯合群体。

2.根据权利要求1所述快速获得大量小麦双单倍体纯合群体的方法，其特征在于：步骤（2）所述2,4-二氯苯氧乙酸溶液须喷施到小麦颖壳里的柱头上，以饱和不流下为准。

3.根据权利要求1所述快速获得大量小麦双单倍体纯合群体的方法，其特征在于：步骤（2）所述离体培养杂交穗的条件为光照3000Lx 14h/d，相对湿度70%。

4.根据权利要求1所述快速获得大量小麦双单倍体纯合群体的方法，其特征在于：步骤（3）所述光培养条件为光照3000Lx 16h/d，相对湿度70%。

5.根据权利要求1所述快速获得大量小麦双单倍体纯合群体的方法，其特征在于：步骤（3）所述剥出小麦单倍体幼胚的方法为：将颖果经70wt%酒精消毒30s，再用10wt%双氧水消毒20min，然后用无菌水冲洗3次，每次5～10min，最后在超净工作台上解剖出幼胚。