[发明专利]一种利用囊胚期胚胎细胞进行胚胎染色体异常检测的方法

权利要求书

1.一种利用囊胚期胚胎细胞进行胚胎染色体异常检测的方法，其特征在于，包括如下步骤：

(1)囊胚期滋养层细胞分离：从发育至囊胚期的受精卵中分离胚胎滋养层细胞；

(2)全基因组扩增：对分离出的胚胎滋养层细胞样本进行全基因组扩增并纯化、并进行基因组DNA的定量分析；

(3)DNA片段化：将步骤(2)中定量分析合格的基因组DNA进行片段化处理并定量分析；

(4)Proton文库构建后进行上机测序以获得每个DNA片段的碱基序列，并对碱基序列进行分析以获得染色体变异信息。

2.根据权利要求1所述的一种利用囊胚期胚胎细胞进行胚胎染色体异常检测的方法，其特征在于，步骤(1)中，在受精卵体外发育到第5天时，分离5-10个胚胎滋养层细胞。

3.根据权利要求1所述的一种利用囊胚期胚胎细胞进行胚胎染色体异常检测的方法，其特征在于，步骤(2)中，对分离出的细胞样本进行全基因组扩增，扩增后的样本用磁珠法纯化DNA；对扩增的基因组DNA进行定量分析，分析检测结果显示无降解、无污染、符合二代测序技术所要求的DNA起始量的样品用于进行下一步实验。

4.根据权利要求1所述的一种利用囊胚期胚胎细胞进行胚胎染色体异常检测的方法，其特征在于，步骤(3)中，对扩增样本进行酶切处理，使DNA的片段长度适合二代测序的长度要求，用EDTA终止实验，然后用磁珠法纯化酶切产物；对于片段化后的DNA进行定量分析及片段大小分析。

5.根据权利要求1所述的一种利用囊胚期胚胎细胞进行胚胎染色体异常检测的方法，其特征在于，步骤(4)中，用DNA酶切后的产物进行文库构建，DNA片段末端补平后纯化，两端加特异性接头后纯化，PCR扩增后纯化。

6.根据权利要求5所述的一种利用囊胚期胚胎细胞进行胚胎染色体异常检测的方法，其特征在于，步骤(4)中，文库构建后，计算文库的稀释倍数，利用乳液PCR技术形成达到测序要求的阳性测序模板，利用Ion Proton半导体测序系统对测序模板进行测序，最终获得每个DNA片段的碱基序列。

7.根据权利要求6所述的一种利用囊胚期胚胎细胞进行胚胎染色体异常检测的方法，其特征在于，步骤(4)中，将测序结果利用生物信息学分析把这些序列定位到人类基因组参考图谱上，通过与参考基因组的对比分析样本的染色体变异信息。