[发明专利]一种发酵乳杆菌及其在植物真菌病害防治中的应用

说明书

技术领域

本发明属于生防制剂领域，具体涉及一种乳酸菌及其在植物真菌病害防治中的应用。

技术背景

当今社会，农业可持续发展已成为世界大多数国家主导潮流。农业问题作为经济社会发展首要问题，已提上各国议程。中国作为一个农业大国，农业安全生产事关国计民生与社会和谐稳定。大量使用化肥、农药等农用化学品虽然可以使农产品大幅度增产,但也带来了诸多不利影响。针对这个问题，我国相继出现了绿色生态友好的生物农药，与传统农用化学品相比，具有毒性低、选择性强、高效、低残留、易分解等优点。主要包括昆虫天敌、植物源农药、微生物农药、转基因生物、生物化学农药及抗生素农药。

乳杆菌又称乳酸杆菌，是乳酸菌的一属。细胞通常呈规则长杆状，0.5～1.2μm×1.0～10.0μm，有时为球状，成短链。革兰氏阳性，不生孢，细胞罕见以周生鞭毛运动。兼性厌氧，有时微好氧，营养琼脂上菌落凸起、全缘、无色，直径2～5mm。化能异养菌，需要营养丰富的培养基。发酵分解糖代谢，终产物中50％以上为乳酸。不发酵乳酸盐，不还原硝酸盐，不液化明胶，接触酶和氧化酶皆阴性，罕见致病。最适温度30～40℃，耐酸性强，最适pH5.5～6.0，pH3.0～4.5条件下仍能生存。

乳酸菌广泛分布于环境中，特别是动物、蔬菜和食品中，通常栖息于鸟和脊椎动物的消化道，以及哺乳动物的尿道中。在植物体表、土壤、乳制品、肉制品、啤酒、葡萄酒、果汁、麦芽汁、污水以及人畜粪便中，均可分离到。由于乳酸菌在发酵代谢中可产生大量抑菌物质，包括有机酸、酶类、乳酸菌素、过氧化氢、二氧化碳、双乙酰等，因此能有效抑制腐败菌和致病菌的生长，并具有促生长作用。此外，乳酸菌具有丰富的物种多样性，不仅是研究分类、生化、遗传、分子生物学和基因工程的理想材料，而且在农牧业、工业、食品和医药等领域具有极高的应用价值。

发明内容

本发明的目的是提出一株发酵乳杆菌，本发明的另一目的是提供上述的发酵方法，本发明还有一目的是提供发酵乳杆菌在植物真菌病害抑制方面的应用。

本发明的技术方案如为：一株乳酸菌，其分类命名为发酵乳杆菌，菌种的拉丁学名是：Lactobacillus fermentum，参据的微生物：NJHYHWGY20130877，保藏日期是2014年01月17日，保藏中心登记入册编号是CGMCC No.8735。

本发明还提供了上述发酵乳杆菌的发酵方法，其具体步骤如下：将发酵乳杆菌CGMCC No.8735接种于固体培养基中，30～40℃培养12～24h；在固体培养基中选取一个菌落，挑取菌体，接入装有种子液培养基的锥形瓶中，控制转速为100～180r/min，30～40℃条件下培养10～22h得发酵乳杆菌种子液；取种子液接入装有发酵培养基的锥形瓶中，控制转速为120～160r/min，30～40℃条件下培养24～36h得发酵液。

优选上述固体培养基的组分为：蛋白胨9～11g/L，牛肉膏9～11g/L，酵母膏4.5～5.5g/L，柠檬酸氢二钠1.5～2.5g/L，葡萄糖18～22g/L，乙酸钠4.5～5.5g/L，磷酸氢二钾1.5～2.5g/L，硫酸镁0.5～0.6g/L，硫酸锰0.2～0.3g/L，琼脂15～25g/L。

优选上述种子液培养基的组分为：蛋白胨9～12g/L，牛肉膏8～12g/L，酵母膏4～6g/L，葡萄糖16～24g/L，柠檬酸氢二钠1.5～2.5g/L，乙酸钠4～6g/L，磷酸氢二钾1.5～2.5g/L，硫酸镁0.5～0.6g/L，硫酸锰0.2～0.3g/L。

优选上述发酵培养基的组分为：蔗糖20～30g/L，酵母膏15～25g/L，KCl0.6～1.0g/L，柠檬酸氢二钠1.5～2.5g/L，乙酸钠4～6g/L，磷酸氢二钾1.5～2.5g/L，pH 5.5～6.5。

优选上述种子液培养基的装液量为种子液培养基体积占锥形瓶容量的16～40％；发酵培养基的装液量为发酵培养基体积占锥形瓶容量的16～40％，种子液与发酵培养基的体积比为1：(10～100)。

本发明还提供了上述发酵乳杆菌在植物真菌病害防治中的应用，其中植物真菌病害菌株优选棉花黄萎病、番茄灰霉病或水稻纹枯病；其应用方法为制备乳酸菌素浓缩液，将所述乳酸菌素浓缩液稀释1000～1500倍，喷洒于农作物叶面；