[发明专利]一种ELISA用样品稀释液及其制备方法

说明书

技术领域

本发明涉及一种样品稀释液，具体的说是一种ELISA用样品稀释液及其制备方法。

背景技术

目前行业内使用的样品稀释液基本都通用为PBST液，由十二水磷酸氢二钠、磷酸二氢钾、氯化钠、氯化钾、吐温20组成。优点是生产成本低廉，缺点是仅有盐缓冲液而无法对样本待测物进行有效保护，且与血清环境有较大区别，基质效应明显，影响检测结果的准确性和重复性。

发明内容

本发明目的是为解决上述技术问题的不足，提供一种ELISA用样品稀释液，使用该稀释液体对ELISA样品进行稀释，降低了基质效应的干扰，检测结果的准确性、重复性及稳定性大大提高。

一种ELISA用样品稀释液，由血清蛋白、腺苷二磷酸、乙二胺四乙酸、盐缓冲液、液体防腐剂和纯化水组成，其各成份的质量百分比为：1.5%的血清白蛋白、0.1%的腺苷二磷酸、0.3%的乙二胺四乙酸、0.1%的盐缓冲液和0.2%的液体防腐剂，余量为纯化水；

所述盐缓冲液，每升盐缓冲液中含0.386g二水磷酸二氢钠、1.93g十二水磷酸氢二钠和8.2g氯化钠，余量为纯化水。

所述ELISA用样品稀释液的制备方法，包括以下步骤：以1升ELISA用样品稀释液的制备为例，包括以下步骤：

步骤一、称取0.386g二水磷酸二氢钠、1.93g十二水磷酸氢二钠和8.2g氯化钠置于容器中，量取1000ml纯化水加入容器中，搅拌至完全溶解，得到盐缓冲液；

步骤二、称取15g的血清蛋白加入盐缓冲液中，继续搅拌3-5分钟，得到溶液A；

步骤三、再向溶液A中加入1.0g腺苷二磷酸、3.0g乙二胺四乙酸和2ml液体防腐剂，搅拌至完全溶解，最后加入纯化水定容至1L，搅拌均匀后即为ELISA用样品稀释液。

所述液体防腐剂为ProClin300。

所述血清蛋白为牛血清白蛋白。

有益效果是：

本发明的ELISA用样品稀释液，相比行业现通用的样品稀释液，本发明可以对样品进行保护，有效降低基质效应的干扰，提高检测结果的准确性和重复性。经相关实验验证，其效果显著，即采用本发明ELISA用样品稀释液直到稀释512倍，即已经达到检测低限时，实测值与理论值之间的偏差仍在40%内。本发明的ELISA用样品稀释液，可在低温下长期冻存，且不影响检测结果；解决了PBST溶液在性能不稳定，不能长期保存的缺陷；本发明样品稀释液，含有保护蛋白，尤其是牛血清白蛋白，同时加入了防腐剂、稳定剂，不但可对待测样本进行保护，而且可以模拟血清环境，可大大提高 ELISA检测结果的准确性。

具体实施方式

一种ELISA用样品稀释液，由血清蛋白、腺苷二磷酸、乙二胺四乙酸、盐缓冲液、液体防腐剂和纯化水组成，其各成份的质量百分比为：1.5%的血清白蛋白、0.1%的腺苷二磷酸、0.3%的乙二胺四乙酸、0.1%的盐缓冲液和0.2%的液体防腐剂，余量为纯化水；

所述盐缓冲液，每升盐缓冲液中含0.386g二水磷酸二氢钠、1.93g十二水磷酸氢二钠和8.2g氯化钠，余量为纯化水。

所述ELISA用样品稀释液的制备方法，包括以下步骤：以1升ELISA用样品稀释液的制备为例，包括以下步骤：

步骤一、称取0.386g二水磷酸二氢钠、1.93g十二水磷酸氢二钠和8.2g氯化钠置于容器中，量取1000ml纯化水加入容器中，搅拌至完全溶解，得到盐缓冲液；

步骤二、称取15g的血清蛋白加入盐缓冲液中，继续搅拌3-5分钟，得到溶液A；

步骤三、再向溶液A中加入1.0g腺苷二磷酸、3.0g乙二胺四乙酸和2ml液体防腐剂，搅拌至完全溶解，最后加入纯化水定容至1L，搅拌均匀后即为ELISA用样品稀释液。

所述液体防腐剂为ProClin300。

所述血清蛋白为牛血清白蛋白。

步骤四、在使用前，所有的将ELISA试剂盒的组份恢复到18-26℃；试剂应轻轻旋转或震荡混合；每个样品使用一个单独的吸头；本发明样品稀释液在ELISA试剂盒中的具体使用方法为：

1、取出包被板，在记录表上记录样本的位置；将本发明样品稀释液稀释样品；然后在相应的孔中加入100μL已稀释好的样品；37℃条件下孵育30分钟（±2分钟）。将各孔的液体弃入废液筒，用大约300μL洗涤液洗涤板孔，共洗涤5次。每次洗涤后应吸去孔内的液体。在最后一次洗涤液吸去后，将孔中残留的洗涤液在吸水纸上拍干。每孔加入100μL酶结合物。