[发明专利]一种提高酵母细胞表面目的蛋白展示量的方法

权利要求书

1.一种在酵母细胞表面展示目的蛋白的方法，包括：

(1)将a凝集素的Aga2亚基的编码基因与目的蛋白的编码基因融合，得到融合基因，记为融合基因1；在所述融合基因1中，所述a凝集素的Aga2亚基的编码基因位于5’端，所述目的蛋白的编码基因位于3’端；

(2)将所述融合基因1导入受体酵母细胞，所述受体酵母细胞能表达a凝集素的Aga1亚基，得到表达融合蛋白1的重组酵母细胞，所述融合蛋白1为由所述融合基因1编码得到的蛋白质；所述融合蛋白1展示于所述重组酵母细胞表面；

(3)制备外源表达的融合蛋白2；所述融合蛋白2由a凝集素的Aga2亚基和步骤(1)中所述的目的蛋白融合而成；在所述融合蛋白2中，所述a凝集素的Aga2亚基位于N端，所述目的蛋白位于C端；

(4)将所述融合蛋白2与所述重组酵母细胞反应，使所述融合蛋白2中的所述a凝集素的Aga2亚基通过二硫键与所述a凝集素的Aga1亚基连接，所述a凝集素的Aga1亚基锚定于所述重组酵母细胞的细胞壁，从而实现在所述重组酵母细胞表面既展示所述融合蛋白1，又展示所述融合蛋白2。

2.根据权利要求1所述的方法，其特征在于：在所述方法中，所述融合蛋白2为原核表达产物或真核表达产物。

3.根据权利要求2所述的方法，其特征在于：所述融合蛋白2是按照包括如下步骤的方法制备获得的：将所述融合蛋白2的编码基因导入受体大肠杆菌，得到表达所述融合蛋白2的重组大肠杆菌；裂解所述重组大肠杆菌，得到所述融合蛋白2。

4.根据权利要求1-3中任一所述的方法，其特征在于：在步骤(2)中，所述融合基因1是通过重组表达载体的形式导入所述受体酵母细胞中的；

所述重组表达载体中表达所述融合基因1的表达盒由T7启动子、所述融合基因1和MATα终止子组成。

5.根据权利要求4所述的方法，其特征在于：所述重组表达载体为将所述目的蛋白的编码基因插入到酵母展示载体pYD1的多克隆位点处后得到的重组质粒。

6.根据权利要求1-3中任一所述的方法，其特征在于：所述受体酵母细胞为酿酒酵母EBY100。

7.根据权利要求1-3中任一所述的方法，其特征在于：步骤(4)中，所述反应的条件为20-25℃搅拌反应4-5h。

8.根据权利要求1-3中任一所述的方法，其特征在于：步骤(4)中，所述反应的体系由所述重组酵母细胞悬液与所述融合蛋白2混合而成；所述重组酵母细胞悬液的OD₆₀₀为1. 0～2. 0，所述融合蛋白2在所述体系中的浓度为0. 2～0. 3mg/mL。