[发明专利]用于检测肠癌的标记物及其应用

说明书

本申请为分案申请，原申请的申请号为201410403598.9，申请日为2014年8月15日，发明名称为“用于检测肠癌的标记物及其应用”。

技术领域

本发明属于生物学和医学检验领域，涉及用于检测肠癌的标记物，还涉及所述标记物在检测肠癌中的应用以及相关的试剂盒和检测方法。

背景技术

肠癌是常见的消化道恶性肿瘤，占胃肠道肿瘤的第二位。好发部位为直肠及直肠与乙状结肠交界处，占60%。随着人民生活方式和膳食结构的改变，结直肠癌的发病率和死亡率呈逐年上升的趋势,发病多在40岁以后，男女之比为2:1。目前．结直肠癌早期诊断的方法包括大便隐血检测(Fecal occult blood test, FOBT)、结肠镜检测(Colonoscopy)、粪便DNA突变检测和粪便RNA特异性基因检测等，钡灌肠(Double-contrast barium enema，DCBE)等。结肠镜检测被认为是诊断结直肠癌的金标准，但是它为侵入性检查，需要肠道准备，检查过程中有发生并发症如出血及穿孔危险，患者接受性不高，且花费较大。大便隐血检测虽然为非侵入性检测，但是检查结果容易受饮食等因素的影响，并且对于筛查结直肠癌而言．粪便隐血检测的灵敏度和特异性不够理想。

成熟的microRNA (miRNA)是一类不编码蛋白质的单链的RNA，由18－24个碱基组成，与相应的mRNA结合导致mRNA分解或沉默，从而起到对基因的调节作。近年来的研究显示，miRNA的特异性表达与肿瘤的发生和发展有关，某些miRNA甚至可以起到抑癌基因或癌基因的作用。环氧化酶(COX) 是前列腺素合成过程中的重要限速酶，COX2 在正常组织中不表达，但可在各种刺激因素的作用下诱导表达，故又被称为诱导型早期反应基因，与肿瘤的发生、发展密切相关，近年来的研究发现，COX2 在大部分头颈肿瘤中过表达，Cox2 也是肠癌的生物标志之一。因此，如果能够研发出的相应的肠癌试剂盒使之能够应用于科研领域，将极大地促进肠癌筛查研究及科研成果的转化，对于肠癌的诊疗必将起到巨大的推动作用。

发明内容

本发明人研究发现，miRNA-92a、miRNA-135b、miRNA-18a、miRNA-221、miRNA-19、miRNA-223、miRNA-301a的上调表达与人类多种肿瘤(如肠癌)的发生、发展相关，提示对检测粪便和血清miRNA-92a、miRNA-135b、miRNA-18a、miRNA-221、miRNA-19、miRNA-223、miRNA-301a的表达检测可以成为肿瘤如肠癌检测的指标之一。

本发明提供用于检测肠癌的引物、探针和试剂盒(尤其是用于检测粪便和血清miRNA-92a、miRNA-135b、miRNA-18a、miRNA-221、miRNA-19、miRNA-223、miRNA-301a和COX2）的核酸及检测方法。

本发明包括以下技术方案：

1. 肠癌检测试剂盒，其包含选自SEQ ID NO: 9-27所示的引物和/或探针。

2. 上述1所述的试剂盒，其包含选自SEQ ID NO: 9-15所示的一种或多种引物。

3. 上述1或2所述的试剂盒，其包含SEQ ID NO: 23所示的引物。

4. 上述1－3中任一项所述的试剂盒，其包含SEQ ID NO: 24和/或27所示的探针。

5. 上述1－4中任一项所述的试剂盒，其包含选自SEQ ID NO: 16－22和25－26所示的一种或多种引物。

6. 上述1－5中任一项所述的试剂盒，其包含选自以下的一组或多组引物和探针：

SEQ ID NO: 9、16、23和24；

SEQ ID NO: 10、17、23和24；

SEQ ID NO: 11、18、23和24；

SEQ ID NO: 12、19、23和24；

SEQ ID NO: 13、20、23和24；

SEQ ID NO: 14、21、23和24；

SEQ ID NO: 15、22、23和24；和

SEQ ID NO: 25-27。

7. 上述1－6中任一项所述的试剂盒，其中所述探针带有荧光标记。

8. 上述7所述的试剂盒，其中所述探针的5'用FAM标记，而所述探针的3'用TAMRM标记。