[发明专利]疫苗佐剂制备中的亲水过滤

说明书

本申请是2010.12.03提交的CN201080056000.3，题为“疫苗佐剂制备中的亲水过滤”的分案申请。

本申请要求2009年12月3日提交的美国临时申请61/283,517的优先权，其通过引用全文纳入本文以用于所有目的。

技术领域

本发明涉及例如通过微流化制备疫苗的水包油乳液佐剂的领域。

技术背景

称作‘MF59’[1-3]的疫苗佐剂是一种鲨烯、聚山梨酯80(也称作吐温80)和去水山梨糖醇三油酸酯(也称作司盘85)的亚微米水包油乳液。它也可包含柠檬酸根离子，如10mM柠檬酸钠缓冲剂。该乳液的体积组成可以是约5％角鲨烯、约0.5％吐温80和约0.5％司盘85。参考文献4的第10章、文献5的第12章、文献6的第19章更详细地描述了该佐剂及其制备。

如参考文献7所述，MF59的商业规模的制备是通过将司盘85分散在鲨烯相中且吐温80分散在水相中，然后高速混合得到粗乳液。然后将这种粗乳液重复通过微流化床，产生具有均一油滴尺寸的乳液。如参考文献6所述，然后将微流化乳液滤过0.22μm膜，以除去任何大油滴，得到乳液的平均液滴尺寸在4℃下保持至少3年不变。可用参考文献8中所述的方法测定最终乳液中的鲨烯含量。

许多文献(例如参考文献9-12)描述了可通过微流化然后经0.22μm聚砜滤膜过滤除菌来制备MF59。聚砜是在主要聚合物主链中含有砜基(SO₂)的聚合物，聚砜滤膜公知是疏水滤膜。

本发明的目的是提供另一种制备微流化水包油乳液(例如MF59)的改良方法，特别是适合用于商业规模和使用过滤的方法。

发明内容

本发明提供了一种制备含有鲨烯的水包油乳液的方法，其中该方法包括步骤：(i)制备具有第一平均油滴尺寸的第一乳液，也称作初始乳液或预乳液；(ii)微流化第一乳液形成具有比第一平均油滴尺寸小的第二平均油滴尺寸的第二乳液；和(iii)用亲水膜过滤第二乳液。

本发明还提供了一种制备水包油乳液的方法，其包括步骤：(i)制备具有5000nm或以下的第一平均油滴尺寸的第一乳液，也称作初始乳液或预乳液；(ii)微流化第一乳液形成具有比第一平均油滴尺寸小的第二平均油滴尺寸的第二乳液；和(iii)用亲水膜过滤第二乳液。

本发明还提供了一种制备水包油乳液的方法，其包括步骤：(i)制备具有第一平均油滴尺寸的第一乳液，也称作初始乳液或预乳液；(ii)微流化第一乳液形成具有比第一平均油滴尺寸小的第二平均油滴尺寸的第二乳液；和(iii)用亲水聚醚砜膜过滤第二乳液。

可任选地，第一乳液可用匀质器如下所述制备。

如下文详述，第一乳液可具有5000nm或以下的平均油滴尺寸，例如平均尺寸为300nm-800nm。如下所述，第一乳液中尺寸>1.2μm的油滴数量为5x10¹¹/ml或以下。尺寸>1.2μm的油滴是不利的，因为它们由于液滴凝聚和聚结能导致乳液不稳定[14]。

形成后，第一乳液可随之至少通过一次微流化，形成平均油滴尺寸减小的第二乳液。如下所述，第二乳液中的平均油滴尺寸为500nm或以下。如下所述，第二乳液中尺寸>1.2μm的油滴数量为5x10¹⁰/ml或以下。为了实现这些特征，必须将乳液组分通过微流化装置多次，例如2、3、4、5、6、7次。

然后第二乳液可经亲水膜过滤，例如亲水聚醚砜膜，得到可适用作疫苗佐剂的水包油乳液。过滤后产生的水包油乳液的平均油滴尺寸为220nm或以下，例如135-175nm，145-165nm，或约155nm。过滤后产生的水包油乳液中存在的尺寸>1.2μm的油滴数量可以是5x 10⁸/ml或更少，例如5x 10⁷/ml或更少，5x 10⁶/ml或更少，2x 10⁶/ml或更少，或5x 10⁵/ml或更少。

过滤后形成的最终水包油乳液中尺寸>1.2μM的油滴可比第一乳液以少至少10²倍，理想的是至少少10³倍(例如少10⁴倍)。

在一些实施方式中，在步骤(iii)之前进行一轮以上的步骤(i)和(ii)。类似的，可多次重复独立步骤(i)和(ii)。