[发明专利]一种促进杏黄兜兰无菌苗生长及增殖的方法

说明书

技术领域

本发明属于植物生物技术领域，具体地，涉及一种促进杏黄兜兰无菌苗生长及增殖的方法。

背景技术

兜兰属(Paphiopedilum)，隶属于兰科(Orchidaceae)杓兰亚科(Subfamily Cypripedioideae)。大多为地生、半附生或附生的多年生草本植物，其株形娟秀，开花时花葶从基生叶丛中抽出，花大而色泽艳丽，唇瓣特化成兜状或深囊状，形状奇特，花期短则数周，长达数月。是兰科中具有很高观赏价值的类群之一，被誉为“拖鞋兰”或“仙履兰”，受到兰花爱好者及园艺学家的广泛关注与喜爱，在植物界和园艺界中享有盛誉。兜兰属在全世界约有80余种，主要分布在热带和亚热带地区。中国是世界兜兰属植物最为丰富的国家，总种类达到27个种，主要分布于西南和南部的热带与亚热带南缘地区，以云南、广西、贵州分布最多。

杏黄兜兰(Paphiopedilumarmeniacum)是兜兰属最具观赏价值的种类之一，花单生，金黄色，花瓣大，唇瓣囊状，常称之为“金兜”，曾多次获国际花展和兰展金奖和一级证书等最高奖，和硬叶兜兰一起被誉为兜兰属的“金童玉女”。近年来，由于市场对于杏黄兜兰的需求日益增加，野外资源近乎濒危，进行产业化栽培生产已经成为满足市场需求的重要途径。

在兜兰生长发育过程中，氮素营养一直是调节植物生长的重要营养之一。氮是植物生长的“生命元素”，其参与植物细胞、组织和器官的构建，也是合成具有生物活性的蛋白质——酶的主要物质来源，还影响着植物的叶绿素合成、光合作用及酶的调节等重要生命过程。在植物组织培养中，植物培养基由大量元素、微量元素和有机元素及碳源组成，而在大量元素中最重要的是氮素营养。通常不同的培养基中所用的氮素营养不同，如MS培养基中所用的为硝酸钾、硝酸铵，B5培养基的氮源为硝酸钾，硫酸铵，而Harvais培养基则是使用硝酸钾，硝酸铵及四水硝酸钙做为氮源，对于植物生长，不同的氮源(硝态氮，铵态氮)及浓度都会影响植物组培苗的生长和发育。

杏黄兜兰的种子微小且无胚乳，无法为胚的发育提供足够的营养，在野外条件下，需要共生真菌提供营养帮助其萌发。目前人工繁育方法主要是利用培养基提供营养进行种子无菌萌发，来繁育幼苗，但这一过程还存在着生长慢，增殖系数低等问题，需进一步优化技术方案获得促进无菌苗生长及增殖的方法。

迄今为止，现有技术中还未见有杏黄兜兰无菌苗生长、增殖及生根最合适的氮源及氮素浓度的相关报道。

发明内容

本发明的目的在于针对现有技术存在的上述不足之处，提供一种促进杏黄兜兰无菌苗生长及增殖的方法。通过调节培养基中的氮源及浓度，确定了对杏黄兜兰无菌苗生长、增殖及生根最合适的氮源及氮素浓度的方法，利用此方法可显著提高杏黄兜兰无菌苗的繁殖效率，为建立杏黄兜兰高效人工繁殖技术体系提供了技术基础。

为了实现本发明的上述目的，本发明提供了如下的技术方案：

一种促进杏黄兜兰无菌苗生长及增殖的方法，在基本培养基中加入不同浓度或不同比例的KNO₃或NH₄NO₃，进行影响无菌苗生长的试验，通过调节不同阶段培养基中的氮源类型、浓度和比例，促进杏黄兜兰无菌苗增殖、生长及生根。

如上的一种促进杏黄兜兰无菌苗生长及增殖的方法，其中所述的调节氮源类型和浓度是指用KNO₃∶NH₄NO₃比例为1∶1，总浓度为60mML^-1，也就是用KNO₃和NH₄NO₃浓度各为30mML^-1的1/2MS培养基促进杏黄兜兰无菌苗增殖；用KNO₃为氮源，浓度为40mML^-1的1/2MS培养基促进生长较多叶片和较大叶面积；用浓度为0或10mML^-1的KNO₃为氮源的1/2MS培养基促进生根。