[发明专利]一种干细胞无血清培养基

说明书

本发明涉及生物领域，尤其涉及一种干细胞无血清培养基，所述培养基添加剂包括以下组分：人血白蛋白5‑30g/L、植物源性重组人血清转铁蛋白1‑10g/L、α1酸性糖蛋白0.1‑8g/L、α2‑HS‑糖蛋白0.1‑8g/L、载脂蛋白AⅠ0.05‑5g/L、载脂蛋白AⅡ0.05‑5g/L、血液结合素0.01‑2g/L、腺苷脱氨酶0.05‑5g/L、丝氨酸蛋白酶抑制蛋白0.03‑3g/L、人转甲状腺素蛋白0.01‑3g/L和人胰岛素0.01‑3g/L。本发明的干细胞无血清培养基排除了动物来源的病原体污染，且成分确定，因此重现性、可控性都要比血清培养基好，体外培养干细胞达到了优于血清培养基的效果，提高了干细胞扩增速度，大大缩短了干细胞培养的时间。

技术领域

本发明涉及生物领域，尤其涉及一种干细胞无血清培养基。

背景技术

干细胞在再生医学(细胞治疗)、药物筛选及早期胚胎发育研究中有广阔的应用前景，但其研究仍面临着巨大的挑战，其中最关键的是干细胞的培养试剂。干细胞培养基的发展经历了从标准滋养层培养到条件培养基培养，到最后的成份确定培养基培养的动态发展过程。起初，干细胞是在滋养层细胞上生长，且培养基中添加了胎牛血清(FBS)和动物来源的生长因子。然而这些动物来源的成分会在临床上引起很多潜在的危险：(1)含有的免疫原和毒蛋白能激发免疫反应，发生免疫排斥，比如，体外培养带有动物来源Neu5GC抗体的细胞，移植到人体内后会产生严重的免疫排斥反应。动物来源组分扩增的细胞一直到人体内后会引起严重的过敏反应和免疫排斥反应；(2)增加了病原微生物污染干细胞的危险性，包括病毒和细菌感染、朊病毒和未知的动物传染病；(3)从滋养层中分离纯化干细胞费时费力；(4)培养系统中的各种复杂未知的营养成份，干扰了基础研究的结果，使研究结果失去了真实性。所以要尽量减少培养系统中的外源性物质，并明确维持干细胞生长的具体成份，建立无外源物质、成份明确的培养系统。这不仅有利于干细胞的临床应用和基础研究，也有利用提高培养系统的可重复性和标准化。

干细胞的临床应用要求用无血清培养基培养。然而目前市场上即使是国际品牌的无血清培养基的培养效果却远远不如带血清的培养基。CN 102827807 A公开了一种无血清培基，其必要组成为IMDM、L-谷氨酰胺、碳酸氢钠、Hepes、重组人胰岛素、重组人转铁蛋白、重组人白蛋白、2-巯基乙醇、原儿茶酸、脂质、氨基酸、维生素、微量元素、氢化可的松、维生素C、粘接胺或重组人纤连蛋白、黄体酮、腐胺、肝素、血清素、EGF、b-FGF、PDGF-BB、IGF-I。CN102634482A公开了一种间充质干细胞的无血清完全培养基，由基础培养基和添加成份构成，所述的基础培养基为DMEM/F12，所述的添加成分由重组人胰岛素、人血清白蛋白、人转铁蛋白、胆固醇、亚硒酸钠、硝酸铁和葡聚糖组成。上述无血清培养基成分确定，均能用于细胞的培养。而带血清的干细胞培养基因为血清的组成具有不确定的性，可控性、重现性都比较差，不利于产业化、规模化；而且动物血清中潜在的病原体的污染，从而使干细胞的临床应用受到了很大的限制。

无血清无动物源培养基组成确定、重现性、可控性都比较好，因此为进一步推广干细胞在临床上的应用，研发出无血清无动物源且组成确定的干细胞培养基具有重要的临床诊断意义。

发明内容

本发明的目的在于提供一种干细胞无血清培养基，所述培养基化学成分明确、无血清、无动物源，能够避免目前干细胞培养基在临床应用中的弊端。

为达此目的，本发明采用以下技术方案：

一方面，本发明提供了一种干细胞无血清培养基，所述培养基添加剂包括以下组分：