[发明专利]一种重组腺病毒Ad-PTN-Fc

说明书

本发明公开了一种SEQ ID NO.1所示的核苷酸序列，以及包含该序列的重组病毒、转基因细胞。本发明还公开了转基因细胞的用途。本发明制备得到了重组腺病毒Ad‑PTN‑Fc，将其感染间充质干细胞后，间充质干细胞可以有效表达PTN蛋白，将感染了重组腺病毒Ad‑PTN‑Fc的间充质干细胞作为滋养层细胞，可以有效提高造血干/祖细胞的扩增效率，应用前景良好。

技术领域

本发明涉及基因工程领域，具体涉及一种重组腺病毒Ad-PTN-Fc。

背景技术

多效生长因子(pleiotrophin，PTN指蛋白，Ptn指基因)是一种可同肝素结合的分泌性的生长/分化因子，具有刺激细胞粘附、迁移、存活、生长和分化等功能，最早是在1989年由华盛顿医学中心发现，其蛋白分子量大小约为17kD，对肝素有很高的亲和性。

Ptn基因位于染色的提7q33-q34区域，长度大于100kb，由168个氨基酸组成，主要包括一个与分泌有关的信号序列，其中赖氨酸比例很大，约为21％。在哺乳动物，如牛，鼠，人中，PTN的蛋白序列高度保守。PTN蛋白主要表达与发育的胚胎期，在健康的成年组织中则主要存在于大脑中，其他组织较为罕见。除此之外，在子宫，睾丸Leydig细胞中也能够检测到一定水平的表达。PTN蛋白具有两个β折叠结构域，通过一折叠的linker连接，而每个β折叠又含有3个反向平行的β链。在蛋白的两段，分布有大量的赖氨酸，形成于肝素结合的结构，当结合发生时，蛋白构象会发生改变。有研究表明这种结构域可以和细胞外基质的TSR结构域结合，从而接到细胞与胞外基质的相互作用。由于PTN蛋白的序列高度保守，因此其在细胞生长，分化和发育过程中有十分重要的作用。目前的研究证实，PTN蛋白对于血管生成，神经突出生长，诱导细胞迁移和细胞有丝分裂方面都有促进作用。

2010年，美国杜克大学的细胞治疗实验室通过基因芯片筛选的方法发现PTN蛋白在造血干祖细胞的扩增中有重要的促进作用。他们是通过基因芯片筛选的方法筛选不同基质细胞中蛋白表达的差异，发现在人脑内皮细胞中，PTN的表达水平比其他细胞高很多，相比其他非脑内皮细胞多出25倍之多。接下来，他们利用骨髓分离的造血干细胞对PTN在造血干细胞的扩增中的作用进行了深入的研究。通过向造血干/祖细胞(HSPC)的培养体系中加入PTN蛋白，能极大的提高HSPC的扩增倍数。这一发现对于解决HSPC在现有的研究水平下的扩增难的问题具有非常深远的意义。

然而，现有促进HSPC扩增的方法，均是在培养体系中直接加入PTN蛋白，由于蛋白在培养环境下半衰期短，促进HSPC扩增效果难以持续。

发明内容

为了解决上述问题，本发明提供了一种可以表达PTN的重组腺病毒及转基因细胞，用于培养HSPC。

本发明提供了SEQ ID NO.1所示的核苷酸序列。

本发明还提供了一种重组病毒，它包括SEQ ID NO.1所示的核苷酸序列。其中，所述重组病毒是重组腺病毒。其核苷酸序列如SEQ ID NO.2所示。

本发明提供了一种包含转基因的细胞，其中，转入的基因是前述的重组病毒。

优选地，所述细胞是包含前述重组病毒的间充质干细胞。

进一步优选地，所述间充质干细胞是脐带间充质干细胞。

本发明还提供了前述细胞在制备造血干/祖细胞的滋养层细胞中的用途。

滋养层细胞，也叫饲养层细胞，指可以通过分泌蛋白或者接触促进目标细胞生长，增殖的细胞层。

本发明制备得到了重组腺病毒Ad-PTN-Fc，将其感染间充质干细胞后，间充质干细胞可以有效表达PTN蛋白，将感染了重组腺病毒Ad-PTN-Fc的间充质干细胞作为滋养层细胞，可以有效提高造血干/祖细胞的扩增效率，应用前景良好。