[发明专利]一种具有除磷功能的恶臭假单胞菌P.PAO‑1及驯化培养方法

权利要求书

1.一种具有除磷功能的恶臭假单胞菌P.PAO-1的驯化培养方法，包括：

(1)将恶臭假单胞菌P.PAO-1的菌种接种于5-10ml灭菌富集培养基预培养，然后再接种于100-200ml灭菌富集培养基内，在30℃条件下，震荡培养12-24h，清洗，离心，重悬浮形成菌液，菌液OD为1.0-1.3；其中恶臭假单胞菌(pseudomonas sp.)P.PAO-1的保藏编号为：CGMCC No.8073，其16S rRNA序列如SEQ ID NO.1所示；富集培养基为每L含3g牛肉膏、10g蛋白胨、5g NaCl、0.02g KH₂PO₄，及微量元素；

(2)将菌液转移至装有100-200ml灭菌富碳限氮驯化培养基A的容器中，控制菌液细菌细胞浓度约为1.5g干细胞/L，通入氮气5-30min赶尽容器内空气，并将其置于30℃、120r·min^-1的摇床上厌氧培养10-12h；然后将菌液离心、洗涤，重悬浮于富磷无碳的灭菌驯化培养基B中，通入无菌空气好氧培养8-12h后结束本轮厌氧/好氧循环，重复上述厌氧/好氧循环3-5次，得到驯化菌；其中富碳限氮驯化培养基A为：每L含4.92g CH₃COONa、13.6g KH₂PO₄、160mg NH₄Cl、0.27mg FeSO₄、184mg MgSO₄、2mg CaCl₂、1mL微量元素；富磷无碳的灭菌驯化培养基B为每L含13.6g KH₂PO₄、160mg NH₄Cl、0.27mg FeSO₄、184mg MgSO₄、2mg CaCl₂、1mL微量元素。

2.根据权利要求1所述的一种具有除磷功能的恶臭假单胞菌P.PAO-1的驯化培养方法，其特征在于：所述微量元素均为：每L含5g EDTA、5g FeSO₄·7H₂O、1.6gCuSO₄·5H₂O、5g MnCl₂·4H₂O、50mg(NH₄)₆Mo₇O₂₄·4H₂O、50mgH₃BO₃、10mg KI和50mg CoCl₂·6H₂O。

3.根据权利要求1所述的一种具有除磷功能的恶臭假单胞菌P.PAO-1的驯化培养方法，其特征在于：所述步骤(2)中驯化菌应用于除磷，具体为：菌液离心，洗涤后接种于废水中，然后进行厌氧、好氧交替培养，分别在厌氧培养结束时以及好氧培养过程取5ml菌液，离心，测定菌液离心液中的释磷量、吸磷量以及化学耗氧量COD。

4.根据权利要求3所述的一种具有除磷功能的恶臭假单胞菌P.PAO-1的驯化培养方法，其特征在于：所述厌氧5h，好氧3h。