[发明专利]与结直肠癌显著相关的血清多肽生物标志物及其应用

说明书

技术领域

本发明涉及生物标志物检测，具体地说，涉及一种与结直肠癌显著相关的血清多肽生物标志物及其应用

背景技术

大肠癌早期诊断方法主要依赖于分子生物学的发展，对血液和粪便进行无创或微创检测。多种基因的表达或变异被发现与大肠癌发病相关，包括p53基因突变和p53蛋白质过度表达、K-ras基因突变、细胞色素D1表达、BCL-2基因重排、端粒酶家族基因hTERT过度表达有关；此外，APC和MCC基因突变、C-myc基因的过度表达、p16基因突变、CD44基因的异常表达等都与大肠癌有关。继基因表达和变异之后，多种蛋白质肿瘤标志物也被发现与大肠癌发病相关。

肿瘤标志物在肿瘤诊断和个性化医疗中起重要作用，然而既望的肿瘤标志物不能同时具有高敏感性和特异性。譬如，糖类抗原19-9(Casbohydrate Antigen CA19-9)是一种肿瘤相关抗原，对大肠癌的诊断敏感度56.7％，特异度89.7％。CA242是一种唾液酸化糖类抗原，其灵敏度60.0％，特异度95.4％。

发明内容

为了解决现有技术中存在的问题，本发明的目的是提供一种与结直肠癌显著相关的血清多肽生物标志物，其联合使用可以实现对结直肠较准确的诊断。

为了实现本发明的目的，本发明首先提供与结直肠癌显著相关的血清多肽生物标志物，所述生物标志物由7个具有以下质荷比的人血清蛋白组成：1061.10m/z、1213.09m/z、1607.32m/z、1867.02m/z、1897.95m/z、2011.67m/z和5078.81m/z。

本发明还提供了由前述生物标志物组成的质谱模型。

本发明还提供了所述质谱模型的制备方法，具体包括如下步骤：

1)收集多例临床确诊的结直肠癌患者血清和健康对照人员的血清作为两组血清标本，进行低温冷冻备用；

2)对血清蛋白进行质谱前预处理；

3)对预处理过的两组血清蛋白进行基质辅助激光解析电离飞行时间质谱测定，获得多肽质谱图；

4)分析多肽质谱图，筛选出具有下列质荷比峰的7个结直肠癌特征血清蛋白：1061.10m/z、1213.09m/z、1607.32m/z、1867.02m/z、1897.95m/z、2011.67m/z和5078.81m/z；

5)将上述7个结直肠癌特征血清蛋白作为结直肠癌标志物，建立用于检测结直肠癌的质谱模型。

进一步地，所述步骤2)包括使用磁珠纯化和稳定样品中的血清蛋白或多肽。

本发明还提供了前述生物标志物在建立检测结直肠癌的质谱模型中的应用。

本发明的有益效果在于：

本发明运用Clinprot技术(液体芯片-飞行时间质谱技术)对大肠癌患者和健康对照组的血清多肽谱进行分析，该系统由磁珠分离系统、质谱系统、分析软件和可选的液体样品自动处理系统四部分组成，可以对血液等液体中低分子量的蛋白/多肽有效富集和分析，筛选出差异具有统计学意义的多肽峰，敏感性、重复性和特异性均较好。筛选出的显著差异多肽对大肠癌临床诊断和治疗提供新的理想肿瘤标志物有重要的理论意义和实践价值。结果发现质荷比(m/z)分别为1061.10、1213.09、1607.32、1867.02、1897.95、2011.67和5078.81与结直肠癌显著相关，其联合使用对结直肠癌区分的灵敏度为96.3％-99.3％，特异度为95.7％-98.7％。

具体实施方式

以下实施例用于说明本发明，但不用来限制本发明的范围。

实施例1

1、研究对象

研究中111例健康组人员来自在首都医科大学附属北京友谊医院进行常规体检的人群。选入标准为：(1)病历中无躯体疾病或精神异常史；(2)两周内无服药史。将明确诊断为严重的心血管、呼吸、泌尿、消化和血液系统具体疾病的个体予以排除。94例大肠癌患者组来自首都医科大学附属北京友谊医院明确诊断为大肠癌的病人。大肠癌的诊断以病理诊断为金标准，排除患有或曾患糖尿病、心脑血管、肝脏、肾脏、代谢性疾病以及其它肿瘤等重要疾病人群。所有研究对象均签署知情同意，本研究经首都医科大学伦理委员会的批准通过。

2、血浆样品

供分析使用的血浆样品根据自愿原则，静脉穿刺收集清晨空腹血液，37℃环境中半小时凝血。采集的血液以3000r/min离心15分钟分离血清并在-80℃下保存以供蛋白组学分析使用。

3、血浆的磁珠预处理