[发明专利]一种测定杂交油菜新品种的特异性、一致性与稳定性的方法

说明书

本发明公开了一种测定杂交油菜新品种的特异性、一致性与稳定性的方法。该方法包括：获得变异位点；确定待测油菜品种的测试区域；构建数据库；确定抽样量后，随机抽样混合并提取混合样本的DNA；制备引物；利用引物对混合样本的DNA进行扩增，扩增产物用于构建高通量测序文库；对高通量测序文库进行高通量测序，得到测序片段组；分析测序片段组，获得待测油菜品种基因型和杂株基因型；比较获得近似品种、变异位点和变异位点率；获得杂株品种后，计算杂株率；利用变异位点、变异位点率和杂株率，判断待测油菜品种特异性、一致性和稳定性。所述方法能够准确、完整地判断待测油菜品种的特异性、稳定性与一致性，且测试速度更快。

技术领域

本发明涉及生物技术领域，特别涉及一种测定杂交油菜新品种的特异性、一致性与稳定性的方法。

背景技术

作为一种特化的知识产权，植物新品种已经成为一个公司及至一个国家的核心竞争力。植物新品种授权与相关法律问题的解决依赖于DUS测试，即对待测油菜品种的特异性(Distinctness)、一致性(Uniformity)和稳定性(Stability)的田间种植鉴定或室内分子标记鉴定。田间种植鉴定流程为：将待测油菜品种与近似品种同时植于田间，在2年及以上的生长季节内，观察它们的多个性状，根据性状表现判断待测油菜品种与近似品种的差异显著性，即特异性，同时判断群体内杂株比例，即一致性和稳定性；室内分子标记鉴定的流程为：分单株提取待测油菜品种与近似品种中每个样本的DNA，并分别对每个样本的每个测试区域进行PCR(Polymerase Chain Reaction，聚合酶链反应)，并对每个PCR产物进行电泳或一代测序检测，根据检测结果，获得待测油菜品种与近似品种的差异位点比例，根据差异位点比例，判断待测油菜品种的特异性。

田间种植鉴定的缺点是：周期长、工作量大，环境影响性状，导致判断不准确。室内分子标记鉴定的缺点是：需要分别处理每个样本的每个测试区域，工作量大，不能对样本与测试区域大量抽样，无法计算杂株率，因而无法进行稳定性与一致性的测试。田间种植鉴定与室内分子标记鉴定的共同缺点是：均由于工作量大的原因，无法从现有品种中客观选择近似品种，只能由品种权申请人提供，而基于商业利益等动机，品种权申请人提供的近似品种可能不真实，从而造成错误品种授权的法律后果。

发明内容

为了解决现有技术中检测杂交油菜新品种特异性、一致性与稳定性不准确的问题，本发明实施例提供了一种测定杂交油菜新品种的特异性、一致性与稳定性的方法。所述技术方案如下：

本发明实施例提供了一种测定杂交油菜新品种的特异性、一致性与稳定性的方法，所述方法包括：

获得不同油菜品种间的变异位点；

通过所述变异位点确定所述待测油菜品种的测试区域，所述测试区域包括通用测试区域，至少部分所述变异位点包含在所述通用测试区域内；

构建包含所述不同品种的在所有所述测试区域的基因型的数据库；

确定所述待测油菜品种的抽样量SN后，随机抽样混合并提取混合样本的DNA；

制备扩增所述测试区域的引物，所述引物包括所述通用测试区域引物；

利用所述引物对所述混合样本的DNA进行扩增，得到所述测试区域的扩增产物，所述扩增产物用于构建高通量测序文库；

对所述高通量测序文库进行高通量测序，得到测序片段组；

分析所述测序片段组，获得待测油菜品种基因型和杂株基因型；

将所述待测油菜品种基因型与所述数据库中的所述不同品种的基因型比较，获得所述待测油菜品种的近似品种、变异位点和变异位点率；

将所述杂株基因型与所述数据库中的所述不同品种的基因型比较，获得杂株品种后，计算杂株率；