[发明专利]白芨开放式组培育苗方法

说明书

技术领域

 本发明属于植物组培繁殖技术，尤其是一种白芨开放式组培育苗方法。

背景技术

白芨是兰科白芨属植物白芨Bletillastriata（Thunb）Reichb.f的块茎，性味苦甘凉，有较好的补肺止血、消肿生肌作用，被广泛用来治疗多种疾患。野生白芨经过多年人工采挖，几乎已绝迹，为了满足医药需求，人们施行了人工种植，通常是将其块茎切成带芽眼的小块后在地上栽种，费工耗时、效率低下，为了提高种苗的繁殖率，人们又尝试以组织培养技术来培育白芨种苗，如发表在《西南农业学报》2009年22卷第3期上的“白芨组培快繁育苗技术研究”公开的技术就是其中的一种，它比传统的块茎分切育苗法大大进了一步，省工、省种、育苗率高，但在农村边远基层的实践中亦发现一些不足：该法育白芨其技术工艺流程较为复杂，技术要求较高，操作人员必须具备较高的专业素质，而且要求无菌操作，其设备如高压灭火菌器，专用组培瓶等投资较大，增加了种苗生产成本。

发明内容

针对上面提到的现有技术中的不足，本发明的目的就在于提供一种开放式非无菌条件下白芨组培育苗的方法，以降低成本、简便操作、提高效益。

本发明通过如下技术方案实现：

一种白芨开放式组培育苗方法，包括配制抑菌培养基、培养容器消毒、培养基分装和分段接种培育步骤，所述的抑菌培养基为诱导培养基、增殖培养基和壮苗生根培养基；白芨种子在开放非无菌条件下组培育苗，所用抑菌培养基不经高压灭菌，煮沸后就直接分装到聚乙烯塑料杯，凉置后在开放非无菌条件下接种培育；

抑菌培养基的三种配方按质量比例分别是：

（1）诱导培养基：1／2MS+6-BA1.0mg／L +白糖25g／L+活性炭0.1g／L+琼脂粉4g／L+凯松0.8—3.5‰+尼泊金脂钠0.5—1.5‰；

（2）增殖培养基：1／2MS+6-BA1.0mg／L+NAA0.2mg／L+白糖25g／L+活性炭0.1g／L+琼脂粉4g／L+凯松0.8—3.5‰+尼泊金脂钠0.5—1.5‰；

（3）壮苗生根培养基：1／2MS+NAA0.4mg／L+香蕉泥50g／L+白糖30g／L+活性炭0.1g／L+琼脂粉4.1g／L+凯松0.8—3.5‰+尼泊金脂钠0.5—1.5‰；

所述的凯松与尼泊金脂钠配制构成抑菌混合液；

所述三种抑菌培养基的配制步骤为：

以1／2MS为基本培养基，再按配方添加配比物及抑菌混合液，调整pH值至5.6—5.8，然后持续煮沸15分钟后分装。

优选的是，采用84消毒液1000 mg／L对培养杯，培养室进行消毒；用70％酒精对接种室和操作台面喷雾降尘消毒；

优选的是，开放非无菌条件下接种培育包括在经消毒、相应洁净的操作环境下，将不同阶段的培养物转接到分装的匹配培养基中；培养室温控制在25±2℃；光照控制在800—2000LX；

优选的是，香蕉泥须先加热煮沸后再加入。

采用这种方法培育白芨苗，有效地克服了现有技术中的不足问题，减少了高压灭菌、无菌室及专用培养容器等设备投资，操作较为简便，降低了育苗成本，提高了经济效益。

具体实施方式：

实施例：

以1／2MS为基本培养基，加入6—苄基氨基嘌呤（6—BA）1mg／L、白糖25g／L、活性炭0.1g／L和琼脂粉4g／L共同配制成营养液，再加入凯松3.5‰与尼泊金脂钠1‰配制的抑菌混合液，并调整pH值为5.6，加热煮沸后持续15分钟，分装到一次性聚乙烯塑料杯，凉置至第二天作为诱导培养基接种白芨果英种子；以1／2MS为基本培养基，加入6—BA1mg／L、萘乙酸（NAA）0.2mg／L、白糖25g／L、活性炭0.1g／L和琼脂粉4g／L组成营养液，再加入凯松2‰与尼泊金脂钠1.2‰配制的抑菌混合液，调整pH值为5.6，持续煮沸15分钟，分装到一次性聚乙烯塑料杯，凉置至第二天作为增殖培养基转移接种2cm高的白芨小苗；以1／2MS为基本培养基，加入NAA0.4mg／L、白糖30g／L、活性炭0.1g／L、琼脂粉4.1g／L以及经过煮沸的香蕉泥50g／L，配成营养液，再加入凯松1.5‰与尼泊金脂钠1.3‰配制的抑菌混合液后调整pH值达5.8，持续煮沸15分钟，分装到一次性聚乙烯塑料杯，凉置至第二天作为壮苗生根培养基转移接种3cm高的白芨小苗。