[发明专利]一种具有抑制Aβ聚集活性的化合物的制备方法与用途

说明书

技术领域

本发明属于微生物药物领域，特别涉及一种具有抑制Aβ聚集活性的化合物的制备方法与用途。

背景技术

阿尔茨海默症(Alzheimer’s disease，AD)是一种慢性的大脑退行性疾病，由于大脑器质性损害引起脑功能障碍，使记忆、理解、自我控制能力等发生进行性退化和持续性智能损害，影响到日常的生活运动，是老年期痴呆的最常见类型。近年来随着我国人口老龄化的加重，AD的发病率及患病率也逐渐增高，AD的发病机制和防治渐渐成为了国内外研究的热点，也得到了越来越多的医学关注。

目前，关于AD的发病机制尚不完全清楚，但临床发现AD患者脑中的标志性病理特征表现为区域性神经元丧失、细胞内神经元纤维缠(neurofibrillary tangles，NFTs)和主要由β-淀粉样蛋白(amyloidβ-protein，Aβ)组成的老年斑。淀粉样蛋白级联假说强调毒性Aβ是AD病变的始发因子，在AD病程中发挥关键作用。大量实验证实，Aβ对神经元具有神经营养和神经毒双重作用，低浓度Aβ对未成熟分化的神经元表现出营养作用，随Aβ逐渐积累浓度升高，对成熟分化的神经元则呈现出神经毒性，使树突和轴突退缩，导致神经元减少或缺失。

目前针对AD的临床治疗药物主要为胆碱酯酶抑制剂、自由基清除剂、抗炎药、脑细胞代谢和血液循环改善剂、钙拮抗剂等，但这些药物均存在一定的毒副作用和使用限制。因而筛选具有抑制Aβ聚集的小分子先导化合物正成为研制AD治疗药物的热点。

发明内容

本发明的首要目的在于提供一种生产具有抑制Aβ聚集活性的化合物的链霉菌。本发明的另一目的在于提供所述的化合物的制备方法。本发明的再一目的在于提供所述的化合物或链霉菌的用途。

本发明的目的通过下述技术方案实现：

一种生产具有抑制Aβ聚集活性的化合物的链霉菌，为保藏编号为CCTCC NO：M 2015103的链霉菌X210408(Streptomyces sp.X210408)。所述的具有抑制Aβ聚集活性的化合物的结构如式Ⅰ所示：

所述的链霉菌X210408从采自中国海南省文昌红树林的土壤样品中分离，并与2015年03月12日保藏于中国典型培养物保藏中心。该菌株的16S rRNA基因序列的GenBank登录号为FJ261963，序列如SEQ ID NO.1所示。

一种利用链霉菌X210408制备具有抑制Aβ聚集活性的化合物的方法，包括如下步骤：

(1)将链霉菌X210408经平板活化后接种于ISP2液体培养基中培养，再转接到OB培养基中进行发酵。所述的OB培养基的配方为：燕麦粉20g/L，牛肉提取物3g/L，葡萄糖20g/L，FeSO₄ 0.4g/L，MgCl₂·4H₂O 0.4g/L，CaCO₃ 3g/L，海盐3g/L，pH值为7.0。

(2)将步骤(1)获得的发酵液用乙酸乙酯萃取、浓缩得粗提物。

(3)将步骤(2)获得的粗提物在硅胶中用二氯甲烷和甲醇组成的洗脱液进行洗脱，收集洗脱液。

(4)将步骤(3)获得的含有目的化合物的洗脱液浓缩，通过柱层析以及半制备液相分离纯化得到式Ⅰ所示的具有抑制Aβ聚集活性的化合物。

步骤(3)中所述的硅胶优选为300～400目的硅胶。

优选的，所述的制备具有抑制Aβ聚集活性的化合物的方法，包括如下步骤：

(1)将链霉菌X210408经平板活化后接种于ISP2液体培养基中，28℃、220r/min条件下振荡培养3d，再以5％的接种量接种到OB培养基中，28℃、220r/min条件下振荡培养7d。

(2)将步骤(1)获得的发酵液用等体积乙酸乙酯萃取3次，合并乙酸乙酯层，减压浓缩获得乙酸乙酯提取物。

(3)将步骤(2)获得的提取物在硅胶中进行梯度洗脱，依次用体积比分别为100:1、90:1、80:1、60:1、40:1、20:1、10:1的二氯甲烷和甲醇组成的七个洗脱液进行洗脱，依次获得七个洗脱液洗出的组分。

(4)将步骤(3)获得含有目的化合物的组分合并后，减压浓缩，再将浓缩后的合并组分进行羟丙基葡聚糖凝胶LH20柱层析以及C18半制备液相分离纯化，得到式Ⅰ所示的具有抑制Aβ聚集活性的化合物。

步骤(2)和(4)中所述减压浓缩的温度优选为40～100℃。