[发明专利]一种人内皮细胞钙粘素融合蛋白及其制备方法与应用

权利要求书

1.一种可用作人工细胞外基质的人内皮细胞钙粘素融合蛋白，其特征在于：是人内皮细胞钙粘素胞外域与人免疫球蛋白IgG的Fc结构域的融合蛋白hVE－cad－Fc，其基因序列为序列表中＜400＞1所示序列。

2.权利要求1所述人内皮细胞钙粘素融合蛋白的制备方法，其特征在于：具体步骤如下：

(1)构建pcDNA3.1/VE－cad－Fc表达载体，转化大肠杆菌，质粒小提；

(2)PEI转染293－6E细胞，6天后收集上清，通过rProteinAFF和SEC纯化蛋白；

(3)纯化蛋白进行SDS－PAGE和Westernblot分析。

3.权利要求1所述人内皮细胞钙粘素融合蛋白的应用，其特征在于：用于材料表面修饰即hVE－cad－Fc融合蛋白基质化条件，具体条件为：

(1)使用无菌PBS(－)或PH＝7.4生理盐水溶解所述融合蛋白，配制成所需溶液，浓度0.1－30ug/ml；

(2)37℃孵育2－8h或者4℃孵育12－24h；

(3)弃上清，用PBS或生理盐水清洗3次，除去未稳定结合的hVE－cad－Fc融合蛋白，即获得稳定的内皮细胞钙粘素活性域蛋白层，立即用于细胞实验或者PBS浸泡保存。

4.根据权利要求3所述的应用，其特征在于：所述融合蛋白，包括血管内皮钙黏素蛋白的胞外域和免疫球蛋白的Fc结构域，通过Fc介导的物理或化学结合，用于修饰二维平面或三维支架表界面。

5.根据权利要求3所述的应用，其特征在于：所述配制的所需溶液为磷酸缓冲液，过酸或过碱会使融合蛋白二聚体结构解聚。

6.根据权利要求3所述人内皮细胞钙粘素融合蛋白基质化的应用，其特征在于：能够用于改善了疏水材料的亲水性，并且显著提高材料表面的内皮细胞选择性粘附性能。

7.根据权利要求3所述人内皮细胞钙粘素融合蛋白基质化的应用，其特征在于：能够用于促进VE－cadherin阳性表达细胞(如内皮祖细胞，内皮细胞等)的粘附，增殖和伸展，使细胞处于间充质形态。

8.根据权利要求3所述人内皮细胞钙粘素融合蛋白基质化的应用，其特征在于：能够用于提高内皮细胞的血管性血友病因子的表达和一氧化氮的释放。

9.根据权利要求3所述人内皮细胞钙粘素融合蛋白基质化的应用，其特征在于：用于激活膜蛋白VE－cadherin/抗凋亡蛋白Bcl－2信号通路。

10.根据权利要求3所述人内皮细胞钙粘素融合蛋白基质化的应用，其特征在于：以hVE－cad－Fc作为一种人工细胞外基质用于生物医学材料的功能化改性，改善材料内皮细胞亲合性，提高材料的血液相容性及促进组织工程内皮化和血管化。