[发明专利]一种基于禽网状内皮组织增生症病毒LTR的真核表达线性化载体的构建方法及应用在审
申请号: | 201510154789.0 | 申请日: | 2015-04-02 |
公开(公告)号: | CN104711294A | 公开(公告)日: | 2015-06-17 |
发明(设计)人: | 叶建强;田晓彦;范中雷;秦爱建;邵红霞 | 申请(专利权)人: | 扬州大学 |
主分类号: | C12N15/867 | 分类号: | C12N15/867;C12N15/66 |
代理公司: | 南京知识律师事务所 32207 | 代理人: | 卢亚丽 |
地址: | 225009 *** | 国省代码: | 江苏;32 |
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摘要: | |||
搜索关键词: | 一种 基于 网状 内皮 组织 增生 病毒 ltr 表达 线性化 载体 构建 方法 应用 | ||
1.一种基于禽网状内皮组织增生症病毒LTR的真核表达线性化载体的制备方法,其特征在于,利用下述引物,以SNV毒株为模板,进行PCR扩增得REV病毒LTR线性化载体;
上游引物:5‘ccaacagagatggataccctaggtcaatg3’;
下游引物:5‘agacggaagacactggaggcaaaaggctc3’。
2.一种利用禽网状内皮组织增生症病毒LTR的真核表达线性化载体表达外源基因的方法,其特征在于包括以下步骤:
1)以含REV病毒前病毒全基因组质粒SNV为模板,以SEQ IDNO.1和2为引物,PCR扩增出含REV病毒LTR的真核表达线性化载体;
2)以外源基因为模板,以SEQ IDNO.3和4为引物,PCR扩增出外源基因片段;
3)并利用重组酶ExnaseTM II对步骤1)和2)得到的PCR产物进行快速重组克隆;阳性克隆即可进行真核细胞转染、表达鉴定。
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