[发明专利]一种麦芽寡糖基海藻糖合成酶突变体的制备及其应用有效
| 申请号： | 201510155100.6 | 申请日： | 2015-04-02 |
| 公开（公告）号： | CN104745562A | 公开（公告）日： | 2015-07-01 |
| 发明（设计）人： | 吴敬;宿玲恰;吴世雄 | 申请（专利权）人： | 江南大学 |
| 主分类号： | C12N9/90 | 分类号： | C12N9/90;C12N15/61;C12N15/10;C12N15/70;C12N1/21;C12P19/24;C12P19/12 |
| 代理公司： | 北京爱普纳杰专利代理事务所(特殊普通合伙) 11419 | 代理人： | 张勇 |
| 地址： | 214122 江*** | 国省代码： | 江苏;32 |
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| 摘要： | |||
| 搜索关键词： | 一种 麦芽 寡糖 海藻 合成 突变体 制备 及其 应用 | ||
1.一种麦芽寡糖基海藻糖合成酶突变体，其特征在于，通过将麦芽寡糖基海藻糖合成酶的蛋白表面疏水区域相关氨基酸残基进行取代后得到；所述麦芽寡糖基海藻糖合成酶的氨基酸序列如SEQ ID NO.1所示；所述取代是将第96位亮氨酸突变为苏氨酸或组氨酸，或将第106位甲硫氨酸突变为赖氨酸或组氨酸，或将第374位脯氨酸突变为谷氨酸或组氨酸，或将第520位异亮氨酸突变为组氨酸或精氨酸，或将第96位亮氨酸突变为苏氨酸的同时将第106位甲硫氨酸突变为赖氨酸。
2.根据权利要求1所述的突变体，其特征在于，所述突变体是将第96位亮氨酸突变为苏氨酸。
3.根据权利要求1所述的突变体，其特征在于，所述突变体是将第96位亮氨酸突变为组氨酸。
4.根据权利要求1所述的突变体，其特征在于，所述突变体是将第106位甲硫氨酸突变为赖氨酸。
5.根据权利要求1所述的突变体，其特征在于，所述突变体是将第106位甲硫氨酸突变为组氨酸。
6.根据权利要求1所述的突变体，其特征在于，所述突变体是将第96位亮氨酸突变为苏氨酸，同时将第106位甲硫氨酸突变为赖氨酸。
7.一种制备权利要求1-6任一所述麦芽寡糖基海藻糖合成酶突变体的方法，其特征在于，包括如下步骤：
(1)根据确定的突变位点，设计定点突变的突变引物，以携带麦芽寡糖基海藻糖合成酶基因的载体为模板进行定点突变；构建含编码突变体的基因的质粒载体；
(2)将突变体质粒转化进宿主细胞；
(3)挑选阳性克隆进行发酵培养，离心收集细胞，细胞破壁上清即为麦芽寡糖基海藻糖合成酶突变体的粗酶液。
8.编码权利要求1-6任一所述突变体的基因。
9.携带权利要求8所述基因的载体或重组细胞。
10.权利要求1-6任一所述突变体在制备海藻糖中的应用。
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