[发明专利]一种鸡白痢沙门氏菌灭活疫苗的制备方法及其应用

说明书

本发明公开了一种鸡白痢沙门氏菌灭活疫苗的制备方法及其应用，属于兽医生物制品技术领域。本发明所述的制备方法是将鸡白痢沙门氏菌菌种SP7220、SP8441和SP9905分别复苏传代后制成种子菌液，再将种子菌液进行发酵罐深层通气培养增殖，经灭活后与免疫佐剂混合，分装后制成鸡白痢沙门氏菌灭活疫苗。本发明方法简单合理、生产稳定，成本低廉，产品具有安全高效、作用迅速、保护率高、应激小、残留低、保护期长等优点，家禽免疫该疫苗后可同时预防不同亚型鸡白痢沙门氏菌引起的感染，是一种理想的鸡白痢疫苗，具有广阔的应用前景。

技术领域

本发明属于生物制品技术领域，具体涉及一种鸡白痢沙门氏菌灭活疫苗的制备方法及其应用。

背景技术

鸡白痢是由鸡白痢沙门氏菌引起的各年龄段鸡或火鸡的常见多发性传染病。该病自1899年首次发现，目前已呈世界范围流行，造成养禽业的重大损失。20日龄以内的雏鸡感染鸡白痢沙门氏菌后，通常引发急性败血症，死亡率高达80％～100％。目前国内通常采用药物控制的方法减轻疫病的危害，但长期反复用药不仅使饲养成本上升，而且导致细菌耐药性增强以及药物残留等一系列问题，事实证明仅依赖药物控制不是防治鸡白痢的上选对策。相比而言，采用疫苗免疫，既不会造成细菌耐药性增强，也不会产生药物残留，因而更容易被广大养殖者和消费者接受。灭活疫苗具有安全性好，抗原含量高，生产工艺简单等优点，在传染病防治中得到广泛的应用。但是传统的灭活疫苗由于免疫原性不强，通常需重复接种，导致免疫力产生较慢，且鸡白痢沙门氏菌包含三种不同亚型(标准型、中间型和变异型)，而不同亚型间的交叉保护性不高，因而给疫苗研制带来了较大的难度，目前尚未出现能够高效防治鸡白痢的灭活疫苗产品。

发明内容

本发明的目的旨在提供一种用于预防鸡白痢沙门氏菌的灭活疫苗的制备方法。

本发明的原理是从历年来收集、保存的500余株自然病例所分离的鸡白痢沙门氏菌菌种中，经多年反复筛选验证后获得的三株不同亚型的、免疫原性良好的鸡白痢沙门氏菌菌种SP7220(中间型)、SP8441(变异型)和SP9905(标准型)作为制苗菌种，经培养灭活后采用新型佐剂配方制备疫苗，解决了传统灭活疫苗免疫力产生较慢、细胞免疫保护功能弱、交叉保护性不强等缺点，全面提升疫苗的免疫效力。

本发明具体通过以下技术方案实现：

一种用于预防鸡白痢沙门氏菌的灭活疫苗的制备方法，包括以下步骤：

1)种子菌液的制备：将鸡白痢沙门氏菌菌种(Salmonella pullorum)SP7220、SP8441和SP9905复苏繁殖后，接种平板固体培养基，37℃培养24h，挑选典型菌落接种扁瓶固体培养基，37℃培养24h后用液体培养基洗下菌苔，检验合格后作为种子菌液；

2)半成品制备：将种子菌液按培养基总体积的3.0％接种，经发酵罐37℃深层通气培养12h后，收集菌液，经5000r/min离心15min去除上清液，用含有0.3％甲醛的生理盐水重新悬浮菌泥，置8℃灭活12h，制成半成品；

3)疫苗制备：将半成品与含有0.5mg/ml壳聚寡糖、0.75mg/ml刺五加多糖和20mg/ml蜂胶的佐剂等体积充分搅拌混匀，经无菌检验和安全性检验合格后分装制成鸡白痢沙门氏菌灭活疫苗。

所述的鸡白痢沙门氏菌(Salmonella pullorum)SP7220、SP8441、SP9905均已于2014年10月15日送中国典型培养物保藏中心(中国.武汉.武汉大学)保藏，保藏编号分别为：CCTCC NO.M 2014476、CCTCC NO.M 2014477、CCTCC NO.M 2014478。

所述的液体培养基组成为：蛋白胨15.0g、酵母浸出粉5.0g、甘油12.0ml、硫代硫酸钠5.0g、甘露醇3.0ml、可溶性淀粉6.0g、硫酸镁0.5g、氯化钙0.3g、半胱氨酸1.0g、牛胆盐5.0g、葡萄糖8.0g、蒸馏水1000ml。