[发明专利]一种具有免疫活性和抗肿瘤作用的均一天花粉多糖及其应用

说明书

技术领域

本发明涉及传统中药材天花粉的生物活性成分多糖，属于医药生物技术领域。

背景技术

天花粉(Radix Trichosanthis)作为一种传统的中草药，有着千余年的中医中药临床应用经验。临床上主治宫外孕、葡萄胎、胎盘残留和滋养层细胞肿瘤等。现代研究表明，天花粉中富含蛋白质、多糖、植物凝血素、皂苷和黄酮类等多种化学成分。其中天花粉蛋白已经被分离鉴定，并证实具有抗肿瘤等多种生物活性。对于天花粉中的多糖成分却少有研究。

发明内容

本发明的第一个目的是提供一种具有免疫活性和抗肿瘤作用的均一天花粉多糖。为此，本发明采用以下技术方案：

一种具有免疫活性和抗肿瘤作用的均一天花粉多糖，其特征在于其为对天花粉总多糖分离纯化后得到的均一天花粉多糖(RTPS-Ⅰ)：所述均一天花粉多糖(RTPS-Ⅰ)为白色絮状固体，易溶于水，pH中性，不溶于乙醇、乙醚、丙酮；所述均一天花粉多糖(RTPS-Ⅰ)由碳、氢、氧3种元素组成，不含氮；比旋光度为+165.58；相对黏度12.5/mPa.s(20℃，浓度＝3％)；重均相对分子量(M_w)为1.76×10⁴，数均相对分子量(M_n)为9.28×10³；

本发明均一天花粉多糖RTPS-Ⅰ的结构信息：⑴糖基组成主要是葡萄糖；⑵不含有糖醛酸；⑶糖环为吡喃环；⑷各单糖以α-型糖苷键相连接。

进一步地，本发明所提供的均一天花粉多糖为采用以下方法对天花粉总多糖分离纯化得到的均一天花粉多糖(RTPS-Ⅰ)：

通过DEAE-纤维素柱色谱初步分离，0～0.5mol﹒L^-1NaCl梯度洗脱，合并峰位洗脱液，透析除盐、浓缩，获得的产品经DEAE-琼脂糖凝胶FF色谱柱进一步分离，0～0.8mol﹒L^-1NaCl梯度洗脱，得到各洗脱组分，透析除盐、浓缩、冷冻干燥；再将各洗脱组分经葡聚糖凝胶G-200色谱柱以0.2mol﹒L^-1NaCl为洗脱剂进一步纯化，浓缩除盐，透析，再浓缩，冷冻干燥，得到各天花粉精制多糖组分，其中含量最高的为天花粉多糖(RTPS-Ⅰ)。检测纯度，天花粉多糖(RTPS-Ⅰ)在高效凝胶过滤色谱上呈单一对称峰。

进一步地，所述天花粉总多糖为不含蛋白质、核酸的中性纯粹天花粉多糖，可通过水提、脱蛋白、透析、醇沉方法从天花粉中获得不含蛋白质、核酸的中性纯粹天花粉多糖，得率为2.64％，苯酚-硫酸法测定天花粉多糖含量为85.8％。更进一步地，所述天花粉总多糖采用以下方法制得：将天花粉药材粉碎，石油醚回流脱脂8小时，加15倍水量，70℃提取，减压浓缩，加95％乙醇沉淀。用三氯乙酸(TCA)法脱蛋白，离心除去蛋白质沉淀，透析，浓缩，醇沉多糖，沉淀再用无水乙醇、丙酮和乙醚依此洗涤，冷冻干燥。

本发明还提供了均一天花粉多糖(RTPS-Ⅰ)在制备免疫调节制剂中的应用以及在制备抗乳腺癌和抗宫颈癌药物中的应用。

本发明提供的均一天花粉多糖(RTPS-Ⅰ)对人外周血单个核细胞(PBMC)有明显促增殖和活化作用，上调T淋巴细胞亚群中CD3⁺、CD4⁺、CD8⁺T细胞的含量，并可诱导人PBMC高水平分泌产生TNF-α、IL-6细胞因子，显示出良好的免疫活性。

本发明提供的均一天花粉多糖(RTPS-Ⅰ)对人乳腺癌细胞(MCF-7细胞)和人子宫颈癌细胞(HeLa细胞)生长均可产生明显抑制作用，MCF-7和HeLa细胞主要出现细胞膜皱缩，核质浓缩等肿瘤细胞生长抑制现象。

本发明制备的均一天花粉多糖RTPS-Ⅰ具备良好的免疫活性和抗肿瘤作用，有望开发成具有免疫调节作用和抗肿瘤作用的制剂。在医药、保健食品、生物技术等领域具有潜在的应用前景。

附图说明

图1为DEAE-琼脂糖凝胶FF柱色谱分离天花粉多糖的洗脱曲线图。

图2为均一天花粉多糖(RTPS-Ⅰ)高效凝胶渗透色谱图。

图3为均一天花粉多糖(RTPS-Ⅰ)的红外图谱。

具体实施方式

实施例1：天花粉总多糖的制备